Способ получения s-аденозилметионина

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ ИЯФ П 1) БРЕТЕНИ АВТОРСКОМ ИДЕТЕЛЬСТВ н относится к б к биотехноло охиичесьных частнос ми ки чител так прео ина, Ц выход ткани пе- акади биохи е введения иг.2 - граф адиоактивно етионина, и рафии экстр тн сится бам п ющих прсамин ания спери белк ени ин и изменени учени ессы и и Ь-аденозилосле хромато ти функлученных ансеспечанияссулуемыхге пропилирова организметраиров эой печени крысения Ь-(ц- С),Ф.,актов ткан венного вв после вну .метионинаОснову печивающу ентальновой инже зобретения явлда Б-аденоэилмпечени и получвными изотопами с высоким вкл 1 представлен енения содержа на в ткани печ яется увелиетионина на ение меченого Б-аденозилцели, сос 2-6 ч до девке кры (диоксипр собствует нина в кл позволяет ичением метки.график диния 8-аден -оос.- ,ни крыс ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГННТ СССР ОПИСАНИЕ(71) Всесоюзный онкологическный центр АМН СССР(57) Изобретениеи способам получениячеств как немеченых ченых радиоактивными иэ паратов Б-аденозилметио изобретения - увеличени вдеиозилметионина на 1 ченн и получение мечено Изобре в частнос ществ, об метилиров ния, трав и использ онкологии нерии. Целью ченне вых 1 г ткани радиоакт метионин На фиг намики из зилметио2тивными изотопами Б-аденозилметинина с высоким включением метки. Цель достигаетсяпутем внутрибрюшинного введения животным за 2-6 чдо забоя 150-250 мг/кг массы тела диоксипропиладенина и за 20 мин до забоя Ь-метионина в дозе 100 мг/кг массы тела, извлечения печени, гомогенизации, центрифугирования, экстракции эфиром, хроматографии на фосфоцеллюлозе Се 11 ех-Р, элюции целевогопродукта и лиофилизации, Изобретениепозволяет получить выход Б-аденоэилметионина 2,5 мкг/г ткани печени, аудельная радиоактивность меченогоБ-аденозилметионина достигает20 мкКи/ммоль. Применение предлагаемого способа облегчает обеспечениеработ в области экспериментальнойонкологии и биотехнологии Б-аденозилметионином. 1 з.п. ф-лы, 2 ил. оксипропиладенина; на предлагаемого способа,обесдостижение поставленной авляет.предварительное (за абоя) внутрибрюшинное ввеам производного аденинапиладенина), который спонакопленив Б-аденозилметиотках печениДанный прием получить 6 кратное увели 1.552073чение количества Б-аденозилметионинана 1 г печени крыс по сравнению с известным способом, Получение в этихусловиях меченого соединения обеспе"чивается за счет внутривенного введения 2,5 -, 10 мКи/кг массы тела животных меченого радиоактивными изотопами Ь-метионина за 4-б мин дозабоя,Предлагаемый способ дает возможность получения меченого радиоактивными изотопами Б-аденозилметионина с высоким уровнем включения метки.П р и м е р 1. Самцам белых беспородных крыс весом около 200 г эа4 ч до забоя внутрибрюшинно вводятдиоксипропиладенин в дозе 200 мг/кгмассы тела в концентрации 200 мг/мпФизиологического раствора, Затем за20 мин до забоя внутрнбрюшинно вводят 1. ИеС в дозе 100 мг/кг массы тела. Животных забивают тоанслокациейшейного позвонка, извлекают печень,охлаждают в ледяном Физиологическомрастворе и гомогенизнруют с 17 Н 0и 4 Ч 503-ной трихлоруксусной кислоты. Затем гомогенат центрифугируют втечение 20 мин при 8000 об/мин, супернатант трижды экстрагируют 1 Чэфира, водную фазу Фильтруют и на,носят на колонку (1 7 см) с Се 11 ех-Р,:уравновешенную 1 мМ НС 1. Примеси отделяют пропусканием 100 мл 50 мй НС 1,АйоМе 1 элюируют с 20 мл 0,5 М НС 1и элюат лиофилизируютСодержание АйоИес после указанныхвоздействий составляет в печени около 2,5 мкг/г ткани. Количественноесодержание Б-аденозит:иетионина определяют спектрофотометрически при257 нм.П р и и е р 2. Проводят аналогично примеру 1, но для полученияАйоМей, меченого радиоактивнымн изотопами, дополнительно за 5 иин дозабоя внутривенно вводят 5 мКи/кгмассы тела 31 -метил в С 1 -АйоМе с14 (удельной активностью 40 мкКи/ммоль.При этом выделяют около б 0 икКиШ -метил"С -Ас 1 оМеС: или 30 мкКиЬ-метил- "фСАЙоИе с удельной активностью около 20 мкКи/ммоль.Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить 2,5 мкмольБ-аденозилметионина на 1 г ткани печеки крыс, а после введения меченогометионина выделяют препараты РЬ- метил- С 1-Ы-аденоэилметионина или 1.- И-метил- С-Ы-аденоэилметионина сИудельной активностью 20 мкКи/ммоль.Чистота продукта при этом составляетболее 957.Полученные предлагаемым способом 10препараты Б-аденозилметионина по своим характеристикам (степени гомогенности, удельной активности) удовлетворяют требованиям, предъявляемым кэтому соединению при его использовании для серийных определений активностей специфических Ферментов обмена Б-аденоэилметионина, а также висследованиях процессов метилированияразличных клеточных метаболитов, длякоторых Б-аденозилметионин являетсядонором метильных групп. Кроме того,предлагаемый метод получения Б-аденозилметионина характеризуется методической доступностью и быстротой.Применение .предлагаемого способаоблегчит обеспечение работ в областиэкспериментальной онкологии и биотехнологии необходимым количеством крайне мобильного соединения - Б-аденозилметионина. 4 Формула из обретения1. Способ получения Б-аденозилметионнна, включающий внутрибрюшинноевведение Ь-метионина, забой животного,извлечение печени, ее гомогенизирование, экстракцию эфиром, хромато"графию на фосфоцеллюпозе Се 11 ех-Р,лиофилизацию выделенного продукта,отличающийся тем, что,40с целью увеличения выхода 8-аденозилметионина на 1 г ткани печени,за 2-6 ч до забоя животным вводятдиоксипропиладенин в дозе 150 -250 мг/кг массы тела в концентрации45150-250 мг/мл Физиологического раствора,2. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью получения меченого изотопами Б-аденозилметиожна с высоким уровнем включения метки, за 4-б мин до забояживотным дополнительно внутривенновводят 2,5-10 мКи/кг массы тела ме -ченого радиоактивными изотопами Ь-метионина,