Способ индукции биосинтеза белка при регенерации тканей

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ГОСУДАРСТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ИЗОБ ЕТЕНИЯ,ОПИСА К АВТОРСКО линической ны СО АМН И.Ф.Усынин 8)Н.П. Гормо генов. М.: Н ИНДУКЦИИ ГЕНЕРАЦИИ ие относится жет быть ис эксперимен ССР М.В.Соколова льная е ля на р гу вука, 1986. БИОСИНТЕЗА ТКАНЕЙ к биологии ипользовано для Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для стимуляции процессов регенерации тканей живого организма.Цель изобретения - ускорение биосинтеэа общего и растворимого белка при регенерации.Способ осуществляется следующим образом.При физиологическом покое или за сутки до функциональной нагрузки или воздействия повреждающего фактора животному вводят внутривенно эффективную дозу стимулятора системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ) из класса бактериальных или синтетических полисахаридов: продигиозан или зимозан, или декстрансульфат в количестве 0,25, 50,50 мг на 1 кг массы тела животного соответственно. Максимально выраженную индукцию биосинтеза белка наблюдают через 24 ч.Выраженность процессов физиологической и репаративной регенерации ткани оценивают по изменению скорости биосинтеза структурных (общий белок) и цитоплазвотных: крысы ые кры(21) 4393309/14 (22) 16.03.88 (46) 07.11.91. Бю (71) Институт к тальной медици (72) Л,Е.Панин, (53) 612.015(088 (56) Мертнецов ция экспрессии (54) СПОСОБ БЕЛКА ПРИ РЕ (57) Изобретен медицине и мо МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 6 09 В 23/28, А 61 К 3 стимуляции процессов регенерации тканей живого организма. Цель изобретения - ускорение биосинтеэа общего и растворимого белка при регенерации, В организм внутривенно вводят стимулятор системы мононуклеарных фагоцитов - продигиоэан, или зимозан, или декстрансульфат в количестве 0,25, 50 и 50 мг на 1 кг массы тела животного соответственно, В результате изобретения достигается ускорение биосинтеэа как общего, так и растворимого белка при физиологической и репаративной регенерациитканей. 5 табл. матических (растворимый белок) белков, а также митотической активности клеток.Скорость биосинтеэа белка оценивают по включению С-лейцина в общий.и рас 14творимый белок и выражают в импульсах за 1 мин на 1 мг белка.П р и м е р 1. Берут 4 группы жи контрольную (нестимулированные Вистар) и 3 опытные(стимулированн сы);Первой опытной группе животных вводят продигиоэан эа 1 сут, второй - эа 2 сут, а третьей - за 3 сут до забоя, Количество животных в каждой группе 10, Препарат готовят на физиологическом растворе, вводят внутривенно из расчета 0,25 мг на 1 кг массы тела животного. За 2 ч до забоя всем группам животных внутрибрюшинно вводят 1,0 мл физиологического раствора, содержащего 50 мкКи С-лейцина. После забоя животным вскрывают брюшную полость и извлекают органы и ткани, гомогенизируют их на холоде в течение 1 мин при 3000 об/мин а стеклянном гомогениэаторе. Алик 1689980воты гомогеиата наносят иэ фильтры, обработанные 0,1 М раствором лейцина в 10 Диом растворе трихлоруксусиой кислоты,После отмывки фильтров от несвязанного сбелками С-лейцииа, а также от липидных14компонентов и нуклеиновых кислот, проводят измерение радиоактивности жидкостным сцинтилляциоииым методом,Растворимый белок получают центрифугироваиием гомогеиатэ при 500009,В состоянии физиологического покоявведение продигиозаиа приводит к выраженной индукции биосиитеза белка в боль шинстве исследоваииых тканей, чтосвидетельствует об активации в иих метаболических процессов и физиологической регенерации, Эффект максимален через 24 чпосле инъекции (табл,1).П р и м е р 2, Физической нагрузкой вызывают функциональное напряжение, Проводят 3 серии опытов, В каждой серии берут 3 группы животных: 1 контрольную и 2 опытные, Зэ 1 сут до физической нагрузки первой опытной группе вводят внутривенно 1,0 мл физиологического раствора, второй - 1,0 мл продигиозаиэ в прежней дозе. В качестве физической нагрузки используют плавание 3,5 ч с грузом, составляющим 4 О от массы тела: Температура водь в аквариуме оптимальная 32 - 34 С. Животных забивают сразу после плавания и через 24 ч после окончания плавэиия, Зэ 2 ч до забоя всем животным вводят С-лейции. Взятие-я:материала и измерение удельной радиоактивности проводят по примеру 1.При функциональном напряжении, а тэкжс в период восстановления (6 и 24 ч) скорость биосиитеза белка в тканях у стимулированных животных достоверно выше. Следовательно, стимуляция СМФ продигиозаиом усиливает процессы физиологической регенерации,П р и м е р 3. Вызывают повреждение тканей резекцией 2/3 печени. Берут 5 групп животных (табл,2), 4 и 5 руппам за 24 ч до операции вводят продигиозан. Все 5 групп животных одновременно через 24 ч после операции (т.е, через 48 ч после инъекции) забивают.Для групп 2 и 4 контрольными являются ложнооперироваииые животные (3 и 5), Скорость биосиитеза белка увеличивается у иестимулировэниых животных после резекции печени (2) по сравнению с контролем 3) иа 143", а у стимулированных(4) по сравнению с контролем (ь) - иэ 185/р. Такое резкое возрастание биосинтетических процессов при стимуляции продигиозаном СМФ является опережающей реакцией, усиливающей реапаративную регенерацию.На клеточном уровне это проявляется усилением и ускорением пролиферативных процессов за счет митотического деления клеток; повышение митотической активности у нестимулированных животных начинается только через 24 ч после резекции и достигает максимума к 30 ч (табл.З); у стимулированных животных динамика репаративного процесса другая - пик митотической активности выше и наступает раньше, уже к 24 ч после резекции,Достижение эффекта продемонстрировано и на других полисахаридах (эимоэан, декстрансульфат). При известном однонаправленном воздействии иа СМФ получен однонаправленный индуцирующий эффект на биосинтез белка в тканях печени (табл,4),Научная обоснованность решения подтверждена следующими экспериментами.Повторяют способ по примеру 1. Через 24 ч животных забивают, извлекают печень и перфузируют ее через печеночндю вену сначала раствором Хенкса без Са в тече ние 5 - 10 мин затем проводят рециркуляци онную перфузию органа в течение 25 мии бикарбонатным буфером Рингера-Кребса (рН 7, 4, 37 С), содержащим 0,03 коллагеиазы. После протеолитического переваривания соединительной ткани печень диссоциируют с помощью шпателя. Из полученной клеточной суспензии с помощью дифференциального цеитрифугирования выделяют паренхимиые(гепатоциты) и стромальные клетки печени (макрофаги, эндотелиальные клетки), Паренхимные и стромальные клетки иикубируют отдельно в фосфатном буфере Риигера-Кребса при 37 С в течение 4 ч в присутствии С-лейцина. Через определенные интервалы времени иэ инкубационной среды отбирают аликвоты клеток и измеряют в них удельную радиоактивность белка,Известно, что препараты бактериальных полисахаридов-стимуляторов СМФ при введении и чЬо захватываются клетками мононуклеарной фагоцитирующей системы, в том числе макрофагами печени, что исключает возможность их прямого воздействияна функции пареихимиых элементов органов. Тот факт, что введение продигиоэана за сутки до эксперимента индуцирует биосинтез белка в 1,5-2 раза именно и только впаренхимных (но не стромальных) клетках печени (табл,5), свидетельствует о сущест1889980 15 Таблица 1 5 остоверные изменения по отношению к контрол Табл рные изменения: общий белок 2 - 3, 4 - 5, 2 - 4,растворимый 4 - 5, 2 - 4. Табли вовании причинно-следственной связи между эффектами стимуляции СМФ и индукции биосинтеэа белка в паренхиме органов. Механизм такого стромально-паренхиматозного взаимодействия неясен. 5 Однако в опытахи ччо перенос инкубационной среды от культуры непаренхимных клеток печени после стимуляции их продигиозаном к, культуре гепатоцитов воспроизводит в них эффект индукции 10 биосинтеэа белка, обнаруженный в опытах и ччо. Формула изобретения Способ индукции биосинтеза белка при регенерации тканей, включающий внутривенное введение в организм лабораторных животных биологически активного вещества, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения биосинтеза общего и растворимого белка, в качестве биологически активного вещества используют продигиозан или зимозан, или декстрансульфат и вводят их в количестве 0,25, 50, 50 мг на 1 кг массы тела животного соответственно. в1689980 Таблица 4 тношению к контролю ( Р0,05 стоверные изменени оставитель А.Скур ехред М,Моргента Корректор Н.Коро.Савин каз 3816 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагари- достоверные изменения по отношению к интактным животным (Р0,05).ФТаблица 5