Способ определения сенсибилизации организма бактериальными аллергенами

,:Ь 10:РЕТЕН ут им 16. ЗАР 6 сится к о и примене ьной сенс ластиие в ожет найбактериал диагности эации при хронических заботрь осится областиенение в етение о и может ке бакт Иэо медициити приальной агности енсибил ких заб а ии при ых и хронич вы алн аааа 3 а ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГННТ СССР ОПИСАНИЕ И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕНСИБЦИИ ОРГАНИЗМА БАКТЕРИАЛЬНЬМИ АЛЛГЕНАМИ(57) Изобретение отномедицины и м т леваниях.Целью изобретения является по шение точности способа.Способ осуществляют следующим образом.Сенсибилизацию латекса бактери ь ными антигенами производят накану е проведения последования, Для этого к 1 мл взвеси частиц латекса в дистиллированной воде в концентрации 10 добавляют 1 мл исследуемого бактериального антигена (бактериальные анти- гены получены из Казанского института эпидемиологии и микробиологии), Смесь латекса и бактериальных аллеренов инкубируют в морознльном отде леваниях. Цель изобретения - повышение точности способа. Сенсибилиэируютчастицы латекса антигеном. У больногоберут кровь, выделяют лейкоциты. Затем к ним добавляют латекс, сенсибилизированный антигеном или несенсибилизированный, и в обе пробы вносятлюминол. Пробы инкубируют и проводятзамер уровня хемилюминесценции. Приповышении уровня свечения в опытнойпробе в сравнении с контролем там,где вносят несенсибилизированный латекс, диагностируют сенсибилизациюорганизма к исследуемому антигену. Всравнении с прототипом точность увеличивается на 807. ленни холодильника в течение 18 ч. Затем смесь центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин, надоса дочную жидкость снимают, а к осадку добавляют физиологический раствор до 1 мл, (концентрация частиц латекса, нагруженных бактериальным антигеном, должна также составлять 1 О ).9Для исследования хемилюминесценции сенсибилизированных лейкоцитов у больного из пальца берут кровь в гепаринизированные капилляры, вмещающие 0,1 мл крови (число капилляров зависит от количества исследуемых бактериальных антигенов из расчета 1 капилляр крови на 3 пробы)Герметически запаянные капилляры центрифугируют 5 мин при 500 об/мин. При этом на границе плазма-эритроциты образуется слой лейковзвеси, которыйосторожно отрезают, Лейковзвесь растворяют в среде Хенкса беэ феноловогокрасного иэ расчета 1 капилляр кровина 1,5 мл среды.Смесь лейковэвеси и раствора Хенкса разливают по 0,5 мл во флаконыдля измерения хемилюминесценции, добавляют в контрольную пробу 0,1 млсуспензии латекса без антигена, вопытные пробы - 0,1 мл латекса, нагруженного бактериальными антигенами.Ц пробы добавляют также 0,1 мл 2,8 мМраствора люминола, инкубируют в термостате в течение 30 мин и проводят1 амер хемилюминесценции в режиме счета фотонов.Сопоставляют показатели хемилюминесценции в опытных.и контрольной про 5 е и при повышении свечения в опытной 20Пробе диагностируют наличие специфи,Ческой сенсибилизации к бактериальому антигену, находящемуся в даннойробе.П р и м е р 1. Больной В 14 лет, 25доступил в детское отделение ДБ Р 1г. Киева с диагнозом бронхиальнаяастма, инфекционно-аллергическая форма средне-тяжелое течение, фаза обостроения,30. Из анамнеза известно, что до 7 летчасто болел ОРЗ 16 и более раз в год),В 10 лет перенес тяжелую форму гриппа, осложнившегося бронхопневмонией,вслед за которой появились приступыудушья. До 12 лет приступы повторя 35лись относительно редко. В дальнейШем приступы удушья возобновлялисьпри острых респираторных заболеваниях.40При поступлении состояние больногосредней тяжести: одышка смешанногохарактера, частота дыхания 28 в минуту, бледность кожных покровов. Прифиэикальном исследовании - коробочный45оттенок звука, дыхание ослаблено,большое количество свистящих хриповна выходе. Границы сердца в норме,тоны приглушены, частота сердечныхсокращений 84 в минуту. На рентгенограмме. - усиление и деформация бронхососудистого рисунка с признакамипневмосклероза, сердце правильной конфигурации. Общий анализ крови и мочи -без патологии.55Определение кожной чувствительности к бактериальным аллергенам не проводилось в связи с выраженным обострением заболевания,Обследование ребенка проводят со-гласно предлагаемому способу, Дляэтого у больного из пальца в первыйже день заболевания, одновременно совзятием общего анализа крови, проводят забор крови в гепаринизированныекапилляры (для исследования взято2 капилляра крови на 6 проб). Герметически запаянные капилляры центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин, слойлейковэвеси, образованный на границеплазма - эритроцит, осторожно отрезают и растворяют в 3,0 мп средыХенкса.Смесь лейковзвеси и раствора Хенкса разливают до 0,5 мл во флаконы дляизмерения хемилюминесценции и добавляют в 1-й флакон (контрольный)О, мл латекса без антигена, другиефлаконы - по 0,1 мл раствора латекса,предварительно нагруженного (как описано) следующими бактериальными антигенами: во 2-й флакон - золотистымстафилококком, в 3-й флакон - гемолитическим стрептококком, в 4-й - кейссерией катарралис, в 5-й - протеем,в 6-й - синегнойной палочкой,После внесения латекса во все пробы добавляют 0,1 мл 2,8 мИ растворалюминола, пробы инкубируют в термостате в течение 30 мин и проводят замер хемилюминесценции в режиме счетафотонов с помощью ФЭУа.Получены следующие результаты исследования: хемилюминесценция пробыР 1 (контрольной) 35400 имп/с, пробыР 2 58723 имп/с, В 3 32844 имп/с,9 4 34200 имп/с, У 5 37552 имп/с,9 6 32675 имп/с.Следовательно, хемилюминесцентноесвечение лейковзвеси в пробе 111 2 (со"держащей латекс, нагруженный антиге-.ном золотистого стафилоккока ) выше,чем в пробе, содержащей латекс беэантигенов, в то время как внесение впробы латекса, нагруженного другимибактериальными антигенами, существенно не изменяло значений хемилюминесцентного свечения. На основании полученных данных диагностировано наличие сенсибилизации к золотистому стафилококкуНа основании установленного диагноза в схему лечения больного включены антибиотики, обладающие противостафилококковым действием, в планереабилитационных мероприятий учтенанеобходимость специфической иммуниза. Заказ 8094/51 Тирах 789 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул, Гагарина,10 5 15328 ции в отношении золотистого стафилококка. С помощью предлагаемого способа проведено обследование 158 больных с инФекционно-воспалительными и инфекционно-аллергическими заболеваниями органов дыхания, мочевыделительной системы, желудочно-кишечного тракта (холециститы, колиты, дисбактериоз кишечника), ЛОР-органов (гаймориты, .синуситы, тонзиллиты), связанных с бактериальной сенсибилизацией. Точность диагностики у обследованной группы больных составила 96,8 Х (153 больных), в то же время по прототипу было выявлен правильный диаг, ноз только у 26 больных. Полученные результаты использованы для оптимизации лечения и еокращению сроков пребывания в стационаре. Формула изобретенияСпособ определения сенсибилизации организма бактериальными аллергенами, включающий забор крови, выделение лейкоцитов, ннкубацию их с аллергеном, адсорбированным на носителе, и определение сенсибилизацин осуществляют по увеличению показателей реакции по сравнению с контролем без аллергена, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве носителя аллергена используют латекс и после инкубации с ним лейкоцитов определяют хемилюминесценцию.