Способ дифференциации возбудителя рака стеблей сои diароrтне рнаsеоlоruм var. caulivora от возбудителя ожога бобов и стеблей diароrтне рнаsеоlоruм var. sojae

(71 ) Всесоюзный нательский институт, Р.о 1 е и яее А.ГКпетггЬе яоуЬе БоуЬеап В Меягч 1 еп Р355-366,я Сопреяя,сельскому пособам диких видов арог 1 Ье МарогЬе Готов картофел зованную ные среды: 2 Е-ныи Ф агар, агарика, сусло-агар. ния в стерильных 0,13-ную лимонную т питатель но-глюкозн среду Чапе о клав иро ва добавляют ся ускоиации возосле ав слов иях ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ РАКА СТЕБЛЕЙ СОИ Ь 1 АРОВТНЕ РНАБЕОЬОВ 11 М ЧАВ.САГЫЧОВА ОТ ВОЗБУДИТЕЛЯОЖОГА БОБОВ И СТЕБЛЕЙ П 1 АРОВТНЕ РНАБЕОЬОВ 13 М ЧАВ,801 АЕ(57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к способамдиагностики возбудителей близкихвидов грибов-патогенов растений Марог 1 Ье рЬаяео 1 огцш чаг .саи 11 чога,МарогСЬе рЬаяео 1 огцп 1 чаг.яоае. Цельюизобретения является ускорение и упрощение дифФеренциации возбудителейрака стеблей. сои от ожога бобов и стеблей . Способ заключается в том, что выИзобретение относится кхозяйству, в частности кагностики возбудителей блигрибов-патогенов растенийрЬаяео 1 огпп чаг.сац 11 чога,рЬаяео 1 огшп чаг, со,чае.Целью изобретения являерение и упрощение дифферен деляют чистые культуры грибов (неидентифицированные возбудители рака стеблей сои или ожога бобов и стеблей) культивируют на кислом картофельноглюкозном агаре одновременно при температурах 24-27 и 30-33 С, при этом на 4-5 сут. определяют отношение радиальных скоростей роста колоний, выросших при заданных температурах, и визуально оценивают их культуральные свойства, При этом у возбудителяа рака стеблей сои при 30-33 С по срава нению с 24-27 С происходит резкое замедление темпа роста и изменением культуральных признаков: текстуры, топографии степени развития воздушно- сФ го мицелия, в то время как у возбудителя ожога бобов и стеблей темп роста и культуральные признаки изменяются. Незначительно. Предлагаемый С; способ отличается простотой, быстротой, высокой производительностью.Применение данного способа сокращает время на анализ одного образца в 2- 3 раза по сравнению с общепринятымФ культурально-морфологическим методом, что особенно важно при экспертизе се- в 1 менного материала. 1 табл. будителя рака стеблей сои от воэбдителя ожога бобов и стеблей.кислоту для подкисления сред до рН 4,5-5,8.Предварительно выделяет возбудителей ИарогЬе р 1 таэео 1 огщп чаг,саи 11- чога или Р 1 арогСЬе рЬазео 1 огпп зо 3 ае из растительного материала в чистую культуру следующим образом. Семена или кусочки растений (0,3-0,5 см) после поверхностной стерилизации сулемой (1:1000) или спиртом (963) промывают несколько раэ стерильной дистиллированной водой, обсушивают и помещают в чашки Петри с питательной средой (на картофельно- глюкозный агар, сус ло-агар, агаризованную среду Чапека и др.) Чашки Петри термостатируют при 22-27 С. Вьщеление изучаемых грибов в чистую культуру (в пробирки с питательной средой) проводят визу ально.Вьщеленную культуру возбудителя рака стеблей сои ипи ожога бобов и стеблей высевают уколом на кислый картофельно-гттюкоэньпд агар в центр 25 чашки Петри или небольшим кусочком мицелия 2-3 мм в диаметре и одновременно термостатируют в диапазонах температур 24-27 и 30-33 С.На 4-5 сут. (а если исследуемая 30 культура находится в хорошем физиологическом состоянии, т.е. быстрорастущая, то измерения проводят на 4 еут. колония гриба практически достигает границ чашки Петри - 92 мм) измеряют диаметры колоний грибов, выросших при 24-27 и 30-33 С. Находят среднее значение диаметров, по которым вычисляют радиальную скорость роста колоний за это время в 40 каждом диапазоне температур, и отношение радиальных скоростей 27/30 и 27/33 С. Отношение радиальных скоростей для возбудителя рака стеблей сои больше 30 а для возбудителя ожо га бобов и стеблей близко или равно (отклонение в пределах 307) 1. Одновременно сравнивают изменение культуральных признаков колоний гри 50 бов (текстуры, цвета, топографии ко,лоний, степени развития воздушного мицелия, окраски субстратного мицелиясреды) развивающихся в разных температурных диапазонах.На основании расчета величины отношения радиальной скорости роста колоний гриба и культуральных признаков дифференцируют культуру до вида. П р и м е р. Дпя определения зараженности возбудителями Иарогтйе рЬазео 1 огяп чаг .сатт 11 чога, ИарогС 1 те рЬаэео 1 огцн чаг.ао,)ае было использовано 2 образца семян сои - сорта Ходсон и Колхида. Семена после поверхностной стерилизации помещают на кислый картофельно-глюкоэный агар и теромостатируют при 22-27, на 5 сут визуально по культуральным признакам выделяют 3 культуры, относящиеся к роду РЬотпорзЫ . Далее каждую выделенную культуру помещают на кислый картофельно-глюкоэный агар в центр чашки Петри и термостатируют прио27 и 31 С На 5 сут проводят измерение диаметров колоний и вычисляют радиальную скорость роста колонийопри 27 и 31 С и их отношение, а также на 5 сут определяют характер изменений культуральных признаков исследуемых колоний. Полученные данные представлены в таблице.Иэ таблицы видно, что радиальная скорость роста культур 1 и 2, выделенных иэ семян сорта Кодсон, не менялась при разных температурах и составила 0,38 мм/ч, При этом колонии культур, выращенные при 31 С, по сраво нению с колониями, выращенными приотемпературе 27 С, имели уветтиченную плотность, пушистость воздушного мицелия, а у культуры 2 наблюдалось появление желтовато-зеленого оттенка мицелия, что указывает на принадлежность этих культур к виду МарогСЬе рЬазео 1 огытп чаг. воае. Радиальная скорость роста культуры 3, выделенной из семян сорта Колхида, при 31 С уменьшилась в 4,7 раза по сравнению с радиальной скороо стью роста этой культуры при 27 С. При этом культуральные признаки колоний, выращенных при 31 С, по сравнению с колониями культуры 3, инкулиорованными при 27 С, менялись следующим образом: колонии становили приподнятыми, с плотным воздушным мицелием белого цвета в центре и слаборазвитым паутинным мицелием к периферии, края неровные, размытые, субстратный мицелий светло-желтого цвета, Среда не окрашена.На основании расчета величины радиальной скорости роста колоний гриба при заданных температурах и величины их отношения, а также учитывая5 152 изменения культуральных признаков, определяют культуру 3 как ИарогС 13 е р 1 заяео 1 ог 1 л чаг .сац 12 чога .Предлагаемый способ отличается простотой, быстротой, высокой производительностью. Применение способа сокращает время на анализ одного образца в 2-3 раза по сравнению с культурально-морфологическим методом, что особенно важно при экспертизе сменного материала. ИсследуемыекультурыродаРЬоворв.в Отнонение Радиальная скорость роста копониймм/ч иа 5 сутвью роснил привС Иэмеиенне характера роста копоний прн 31 С на 5 сут.по сравнению с ростом культурпрн 27 С ст гриба, ммсут. С радиальныхскоростей27 С/31 С 27 З 1 27 31 92 92 0,38 0,38 колонии плоские с плотнораввитынприватым ницелиен белого цвета нпунистым к периферии субстратщйннцелнй светло-корнчйевого цвета(бевевый ), среда не окранена.То ке, в центре мнцелнй прноЬретвет нелтовато-велеиый оттенок,Холонии в центре прнподнлтм, сплотнын вовдунным ннцелнем Ьелогоцвета в центре и слаЬораввнтымстелянинся паутиннствая к пернйерии. крал колонии неровюе; суЬстратный мицелнй светло-лелтогоцвета, среда не окрааеиа,92 92 036 03819,5 0,38 008 92 4,7 Составитель П, Иванов Техред МДидык Корректор М.Васильева Редактор О. Юрковецкая Заказ 7481/34 Тираж 501 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул, Гагарина, 101 Формула изобретенияСпособ дифференциации возбудителя рака стеблей сои 132 арогС 13 е р 13 аяео 1 огцш чаг.саи 12 чога от возбудителя ожога бобов и стеблей Марог 11 зе р 13 аяео 1 ог 12 ш чаг. яоае. включающий выделение чистых культур грибов на питательные среды, содержащие источники углерода, азота, минеральные соли и микроэлементы, отбор колоний, содержащих неидентифицированные возбудители рака стеблей сои нли ожога бобов и стеблей, от других родов грибов на 5-7 сут. по культуральным признакам: цвету, текстуре колоний, степени развития воздушного мицелия, пересев культур из отобранных колоний на кислый картофельно-глюкозный агар и культивирование при темпера 7262 6туре 24-27 С с последующей оценкой результатов, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения и 5упрощения дифференциации возбудителей, отобранные культуры грибов дополнительно культивируют при 30-33 С, при этом на 4-5 сут. определяют отношение радиальных скоростей роста 10 колоний, выросших при 24-27 С и 30 о33 С, и визуально оценивают их куль" туральные свойства, а оценку результатов осуществляют по соотношению скоростей роста грибов при разных 15 температурах, при этом при отношениибольше 3 культуру относят к грибам вида 112 арогтИе рЬаяео 1 огцш чаг.сац 12 чога, а при отношении близком ипи равном 1. - к грибам вида Э 1 арог 1 Ье 20 рЪаяео 1 огцп 1 чаг,воде, а также поизменению культуральных признаков, которые в диапазоне 30-ЗЗоС у ЭдарогСЬе р 1 засео 1 огиш чаг. сацНчога, приводят к образованию приподнятой 25 или слабобугристой колониис плотными воздушным мицелием белого цвета в центре и стелющимся паутинистым полупрозрачным мицелием к периферии, в то время, как у Эдарогт 13 е р 13 а яео 1 огцш чаг.яоае в центре плоские,с хорошо развитым мицелием неоднородной плотности белого цвета