Способ определения жизнеспособности возбудителя рака картофеля

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советскиа Социалистических Республик(22) Заявлено 14 с присоединени (23) Приоритет (43) Опубликова (45) Дата опубл 04,76 (21) 2349873/1ем заявкиГеатааретаеаамб кеаатет 611 та Маааатраа 666 р ае Ааааа аеабретаааб а. еткрцтаб(72) Авторы изобретения И,В.Голик и В.Ф.Куэьми Всесоюзный научнэащи исследовательскы растений стнтут) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ВОЗБУДИТЕЛЯ РАКА КАРТОФЕЛЯ делить зооспор 3 2Изобретение касается иммунитета что окраска зооспорангиев развиваетсельскохоэяйственных растений, а имен- ся в течение нескольких недель. При 1 но определения; жизнеспособности воз- этом окрашиваются не все жиэнеспособбудителей. ные эооспорангии.Известны способы определения жизне Предлагаемый способ определения жнэспособности возбудителя рака картофе- неспособности возбудителя рака картоля путем плаэмолиза 11 и окрашивания феля, при котором, с целью быстрого патогенов 12. и точного определения патогена, аналиПервый способ основан на том, что зируемую пробу сначала обрабатывают живым эооспорангиям свойственно плаз- у 20-ным раствором едкого натра, выдемолнзироваться в концентрированных ляют осадок, промывают дистиллирован- водных растворах минеральных солей и, ной водой:и.выдерживают его в смеси деплазмолизироваться при замене этих ЫФ-нога раствора сернокислой меди, растворов.на чистую воду. В основе н.:10-ного раствора хлорной меди, вэявторого способа лежит свойство живой 16 тых вравных объемах, а затем микро- протоплазМы:зооспорангиев окрашивать- скбпнруют.ся в .Растворе триФенилтетразодхлорида, Способ осуществляют следующим обСущественным недостаткате;.:Ийвзмолити- Разом.ческого.метода является его трудоем- Анализу подвергают зооспорангии, выкость и неудобствав проаедание:ана- э деленные иэ опухолей больного растения ФЦти продуктов переработки пораженПроцедура плаэмолнза и;деткттазмблиза, ных раком клубней картофеля и почвы осуществляемая на предметномстекле, или ила.практически не дает, возможности опре- Можно испольэовать эооспарангии па"соотнозтение живых и мертвых 9 Я тогена в чистом виде или содержащиеангиев из-за движения послед- примесь органических остатков, них в процессе замены жидкости, 3 мг инфекции помещают в стекляннуюНа практике не оправдывает себя н центрифужную пробирку, заливают 2 мл способ окрашнвания возбудителя с по-ного раствора ВаОН, подогревают мощью раствора ТТХ по той причине, 30 на спиртовке до кипения и оставляют571515 Составитель Л.МарченковаРедактор Н.Скворцова Техред З.фанта ,Корректор Е.Папп 2976/16 ф; Тираж 541 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий1130354 Москва 4 ЖРаушская наб. д. 45 Заказ филиал ДПП фПатентф, г. ужгород, ул.Проектная, 4 на ночь. Отдельно в пробирке смешивают 1 г пшеничной муки и 10 мл дистиллированной воды и также оставляютна ночь,На следующий день в пробирку с ин-фекцией добавляют 5-6 капель суспен-,эии пшеничной муки, которую получаютв виде надосадочной жидкости привстряхивании набухшей в воде муки споследующим 1 отстаиванием ее.в течение 5 мин.После добавления суспенэии муки инфекцию в пробирке встряхивают и центрифугируют 20 мин при 5000 Д. Образовавшуюся надосадочную жидкость сливают, а осадок дважды промывают дистиллированной водой в течение 60 сек, 1 фДля этого с помощью пипетки по стенкам пробирки залнЪаютосадок 8 мл воды и сразу же сливают. Затем осадоктакимже способом промывают смесЬю,состоящей из равных объемов 20-наго Юраствора Сц 504 и 10-ного раствора СМС 3,После этого осадок снова заливают 5 млэтой же смеси. Пробирку встряхиваютдо полного распыления эооспорангиевв смеси, подогревают до .кипения и ос- ЗВтавляют на 1,5 ч,В процессе этой обработки жизнеспособные эооспорангии окрашиваются в зелено-голубой цвет, а мертвые и прорас.шие остаются. неокрашенными. При этом 36зооспорангии молодого возрасте окрашиваются в голубой 1:вет, а физиологически зрелые - в зеленый.Из осадка берут инфекцию пипеткой.и наносят ее на предметные стекла вЗя таком количестве, чтобы они легко просматривались под микроскопом. Для этого используют 5 предметных стекол.Инфекцию на предметных стеклах покрывают покровнымн стеклами, и подго товленные таким образом препараты подвергают микроскопическому анализу. На каждом стекле:инфекцию просматривают в йяти полях зрения микроскопа. В каж-. дом поле зрения подсчитывают количество окрашенных зоеспорангмев,Формула иэебретенияСпособ определения жинеапособноотк возбудителя рака:Картофеля путем окрашивания эооспорангиев й последующего микроскопирования, о. т д и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью обеспечения быстрого и точного определения, анализируемую пробу сначала обрабатывают 20 ным раствором едкого натра, выделяют осадок, промывают дистиллированной водой и выдерживают его в смеси 2 б-ного раствора сернокислой меди и 10-ного раствора хлорной меди, взятых в равных объемах, а затем микро- скопируют.Источники информации, принятые во внимание при экспертиэег Кирай З-и др. фМетоды фитопатологииф, М., Колос. 1974,с.220.2, Ме 2 вон Я,А. ОРьв н О.А Жоинй Я еас 6 онв, 01 нвв 6 н Яроанфа о 1 ЯунсйуЬчиавнй.4 оой сц е е 1 И а 1 в 1 а л об ц т соероц нд РЬу 1 ора 1 Ьо 0 офу, 1967,57,р 965-968.