Способ получения слюны иксодовых клещей

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ 3 А ПУБЛИЮ С 12 О 1/04 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТ нь ВЫХ (57) ской м к т цемент, Каждую из на наличие вирус на. сос нках бел самки. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ ГКНТ СССР А ВТОРСНОМУ Сви 21) 4323902/28-1422) 03,11.8746) 2309,89. Бюп. У 3571) Институт полиомиелита и внцефалитов АИН СССР2) А.Н,Алексеев и С.П,Чуних53) 612,05 (088.8)56) Каийшап У.В. Аш 1.РЬуз 1 а978, 205, Р 1, р. 76-81. ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЛЮНЫ ИКЕЫДЙ Изобретение относитсяпаразитологии, в части Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к медицинской паразитологии и энтомологии, к способам управления слюноотделением у переносчиков болезней человека и животных, осуществляющих передачу возбудителей со слюной при укусе.Целью изобретения является получение двух фракций слюны клещей.Указанная цель достигается тем, что используют живых голодных иксодовых клещей, гипостом которых вводят в последовательно сменяемые сухие капилляры после перентерального введения секретотропных веществ.Для получения разных Фракций клещу с гипостамом, вставленным в капилляр, вводят адренэнергетик - допамин 10 мИ раствор в количестве 0,2-0,6 мп на особь и получают жидкую слюну, затем капилляр заменяют и вводят холинэнергетик - пилакарпин 103-ный раствор в количестве 0,2-0,4 мл на 2вопросам изучения процессов слюноотделения у переносчиков болезней (клещей), осуществляющих передачу вирусов со слюной при укусе человека. Целью изобретения является отдельное получение двух Фракций слюны. Для достижения цели проводят инъекцию секретотропных веществ и сбор слюны, причем используют .голодных клещей, в качестве секретотропных веществ применяют 10 мМ раствор допамина и 103-ный раствор пилокарпина, которые вводят соответственно в количестве 0,2-0,6 и 0,2-0,4 мп на особь. особь -получаютфракций исследуют а путем титрования У ыхмышек.П р и м е р 1. Получение фракций слюны от клещей Няа 1 ошша апаСо 1 хсош.Самок клещей Няа 1 озйтв апайо 1 сиш, полученных из неочаговай по клещевому энцефалиту территории в виде нимф заражают парентерально вирусом клещевого энцефалита и затеи содержат в термостате при 37 С в течение 7 дней через 7-8 дней содержания при комнатной температуре фиксируют на спине на стержне, конец которого обернут липким пластырем. Параллельно телу клеща наносят две капли парафина для фиксации конечностей. Затем под контролем бинакуляра гипостом вводят в сухой капилляр (оттянутую пасте- . равскую пипетку) с внутренним диаметром, равным диаметру гипостомаПредлагаемый способ позволяет по лучить различные фракции слюны голодных клещей.Получение Фракций слюны позволяет не только обнаруживать наличие возбудителя в них, но и осветить ряд неясных эпидемиологических и эпизоотологических явлений, связанных с диспропорцией между числом обнаруживаемых присосавшихся клещей и уровнем иммунной прослойки у людей и жи вотных. В первом случае это связанос неучитываемым количеством кратковременно присасывающихся самцов иксодид, в жидкой слюне которых в значительном количестве присутствует 45 .Вирусф ВО Втором с тему что грызуны,уничтожающие (скусывающие, счесывающие) присосавшихся клещей (личинок и нимф), оставляют в коже цементные "пробки", которые, как показано, могут содержать вирус, То же явление может наблюдаться и у людей даже при 3 1509403В сочленение вертлуга и коксы 17 пары конечностей стеклянной микро- иглой, изготовленной на микрокузнице аппарата Фонбрюна и закрепленной на металлической игле микродозатора на 10 мкл, вводят 0,2-0,4 мл 10 ММ раствора допамина, и после начала слюноотделения или через 5-10 мин еще 0,2-0,4 мл . 100 М раствора гам ма-аминомасляной кислоты - синергиста допамина.Сменив капилляр, вводят 0,2- 0.,4 мл 10 -ного раствора пилокарпина. 15Полученную в капилляр порцию слюны вместе с кончиком капилляра растирают в ступке с 0,8 мл стерильного физиологического раствора, отцентрифугированную от стекла надосадочную 20 жидкость вводят по общепринятой меФодике в мозг сосункам белых мышей для определения наличия и титра возбудителя, в данном случае - вируса клещевого энцефалита, в разных пор циях слюны.П р и м е р 2. Получение слюны и определение вируса в ней от клещей Регшасепйог шагдхпаСцз.Полученных из природы незараженных самок Эегшасепйог шагаз.пагцз 2-3 и 3-го Физиологического возраста заражают парентерально вирусом. Через 20 дней каждой самке описанным способом вводят 0,4-0,6 мл допамина. Во всех случаях как в опыте (13 самок), так и в контроле (9 самок) получают слюну, среднее количество которой составляет 0,17 мп. В 5 случаях из 10 исследованных проб выделяют вирус с титром 0,1 1 д Ю в0,03 млПроведенные опыты показывают, что под влиянием допамина и гаммааминомасляной кислоты голодными клещами выделяется жидкая фракция слюны, в которой затем устанавливают наличие вируса клещевого энцефалита (показано на клещах Хходев регвц 1 сагцз и Эегшасепгог шагхпагцз - самках и Тхойев г".сдпцв - самцах). Под влиянием введения гамма-аминомасляной кислоты также получают жидкую слюну от Няа 1 ошша апайо 11 сцш, кото" рая так же, как и спонтанно выделяемая под влиянием механичес- кого раздражения капилляром жидкая слюна, вируса в обнаруживаемых количествах в большинстве случаев не со. -держит, Под влиянием пилокарпина получают выделение цементной фракции слюны, твердеющей на воздухе и в капле дистиллированной воды. В цементной фракции слюны у всех оказавшихся зараженными самок клещей Няа 1 ошша апао 1 сцш содержится вирус клещевого энцефалита, причем в максимальных - по сравнению с другими экспериментами - до 2,2 1 я Ю о в 0,03 мл. В некоторых опытах у одной и той же особи Н, апайо 1 й.сцш в жид- . кой спонтанно выделившейся порции слюны, вирус обнаружить не удается, тогда как в цементной фракции он присутствуетТаким образом, показано, что уже первые порции слюны, вводимые в самом начале питания как в кровь и лимфу позвоночного (жидкая фракция слюны), так и контактирующие с живым слоем кожи (цементная пробка), могут содержать вирус в достаточных для начала репродукции количествах и потому представляющих опасность для начала заболевания. извлечении присосавшихся клещей.Ф о р м у л а и э о б р е т е. н и я. Способ получения слюны иксодовых клещей, включающий иньекцию секретотропных веществ и сбор слюны, о, тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с5 1509403 6целью отдельного получения двух фрак- мина и 103-ный раствор пилокарпина, ций слюны, используют голодных кле- которые вводят соответственйо в кощей, в качестве секретотропных ве- личестве 0,2-6,6 и 0,2-0,4 мл на ществ применяют 10 мМ раствор допа- особь.5Составитель А;МакаровРедактор Н.Гунько Техред М,Ходанич Корректор С.ШекмарЗаказ 5765/22 Тираж 501 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открьггиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,01.