Способ получения оксиапатита

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 150387 В 01,1 20/00 САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ВТОВСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Институт биоорганической химииАН БССР(56) Ма)п К. К., ччйпв М. 1., Сое 1 1.А Мос)11 ес Сас 1 цгп Рйоврйа 1 е 1 ог Со)цгппС 1 тгота 1 одгарйу о 1 Ропцс еогс(ез апс 1 Ргогепв.,). Атег. СЛет. Яос., 1959, 81,24,6490 в 64.Махи А, 1, 8 ц 1 точа 6, Е., Чапуцв 1 пп В. Г, Сггапца 1 ес 1 Н 1 с(гохуара 11(е:Ргерага 11 оп апс 1 СЬгогпа 1 ортарЬе Ргорег(ев,Апау(1 са 1 Восеетзгч, 1974, 611, 62 - 71,Изобретение относится к получению сорбентов для хроматографии биополимеров, конкретно, к усовершенствованному способу получения оксиапатита, который широко используется для хроматографического разделения и очистки различных биополимеров и их компонентов (нуклеиновых кислот, белков, олигопептидов, аминокислот и др.),Цель изобретения - повышение адсорбционной емкости оксиапатита по ДНК и увеличение размеров кристаллов оксиапатита.Пример 1. 200 мл 0,5 М раствора 1 Ма 2 Н РО сливают с 200 мл 0,4 М раствора СаС 1 со скоростью 10 мл/мин при интен(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОК С И А 11 А ТИТА (57) Изобретение относится к получению сорбентов для хроматографии оиополиме ров, может быть использовано для синтеза оксиапатита и позволяет в 3- 11 раз повысить его адсорбционную емкость по ДНК, а также в 1,5 - 2 раза увеличить размер его кристаллов. Сущность способа заключается в осаждении брушита путем эквиобъемного смешивания раствора хлорида натрия с раствором гидрофосфата натрия или суспензией, полученной путем добавления раствора хлорида кальция к из. бытку раствора гидрофосфага натрия при молярном отношении кальция к фосфору, равном 0,7 - 0,9, с последующим его превращением в оксиапатит путем нагревания вщелочном растворе гидрофосфата калия. Осаждение брушита также ведут путем двухстадийного смешивания сначала раствора хлорида кальция и вышеприведенной суспензии, а затем растворов хлорида кальция и гидрофосфата натрия при молярном отношении кальция и фосфора, равном 1,10 - 1,25. 1 з.п.ф-лы, 1 табл, ФееСЛ сивном перемешивании. В результате полу- (Г чают гранулы бруш ита размером 40 - 50 м к.Брушит превращают в оксиапатит путем 5-минутного кипячения в 150 мл 1,5 М раствора К 2 НР 04. Скорость поотекания растворителя через стандартную колонку с таким ф, сорбентом равна 20 мл/ч. После 5 декантаций в дистилированной воде и удаления мелких обломков оксиапатита скорость протекания растворителя увеличивается до 48 мл/ч. Адсорбционная емкость для высоко- полимерной ДНК равна 1,5 мг/млПримеры 2, 3. Синтез проводят по примеру 1. Отличаются только концентрации СаСХ3Во втором примере 0,45 М, а в третьем - 0,49 М.Пример 4. В 200 мл 0,5 М раствора МагНРО 4 добавляют 0,5 мл 0,4 М раствора СаС г. Затем 200 мл 0,4 М водного раствора СаСг и 200 мл суспензии сливают одновременно со скоростью 10 мл/ч. В результате получают частицы брушита размером 60 - 80 мк. Оксиапатит, синтезированный из такого брушита по примеру 1, характеризуется адсорбционной емкостью 1 О 0,9 мг/мл и скоростью протекания растворителя через стандартную колонку 81 мл/ч.Примеры 5, б. Синтез проводят по примеру 4, изменяя только количество раствора СаСг, используемого для получения суспензии. Пример 5 - 2 мл, пример 6 - 10 мл.Примеры 7, 8, Проводят синтез по примеру 4, изменяя только концентрацию раствора СаСг, которая составляет в примере 7 - 0,45 М, а в примере 8 - 0,49 М. 20Примеры 9, 1 О. Проводят синтез по примеру 4 с той разницей, что концентрацию СаС 1 берут равной 0,35 М. В примере 9 используют чистый раствор МагНР 04, а в примере 10 суспензию, полученную путем добавления 2 мл СаС 1 г,Примеры 11, 12. Повторяют примеры 9 и 10 соответственно с той разницей, что используют концентрацию СаСг, равную 0,3 М. Пример 13, В 200 мл 0,45 М раствора З 0 МагНРО добавляют 0,5 мл 0,4 М СаСг. Затем 200 мл 0,4 М водного раствора СаСг и 200 мл суспензии сливают одновременно со скоростью 15 мл/мин, в течение 15 мин (Са/Р=0,89). Затем шланги перемешают в чистые растворы 0,45 М МагНРО 4 35 и 0,5 М СаСг (Са/Р=1,11). Сливание продолжают 40 мин со скоростью 17 мл/мин. В результате получают частицы брушита размером 90 - 150 мк. Брушит превращают в оксиапатит путем нагревания в 1,5 М водном растворе КгНР 04 до 99 С и выдерживания при этой температуре 30 мин.Пример 14. Полностью повторяет пример 13, только скорость сливания на первой стадии увеличивают в 2 раза.Пример 15, Полностью повторяет при мер 13, только скорость сливания на первой стадии уменьшают в 2 раза.Пример 1 б. Полностью повторяет пример 13, только на второй стадии используют 0,55 М раствора СаСг (Са/Р=1,23). 4Пример 17. Полностью повторяет пример 13, только на второй стадии используют 0,45 М раствор СаСг (Са/Р=1).Пример 18. Полностью повторяет пример : 3, только на второй стадии используют 0,6 М раствор СаС 1 г (Са/Р=1,39).Пример 19. Полностью повторяет пример 13, только на второй стадии используют 0,53 М раствор СаС)г (Са/Р=1,23).Пример 20, Полностью повторяет пример 13, только на второй стадии используют 0,47 М раствор СаСг (Са/Р=1,09).Характеристики оксиапатитов, полученных по примерам 1 - 20, в сравнении с прототипом, представлены в таблице.Как видно из представленных в таблице данных все образцы оксиапатита, полученные по описываемому способу, характеризуются в 3 - 11 раз большей адсорбционной емкостью по ДНК в сравнении со способом-прототипом.В то же время образцы, полученные в две стадии по примерам 13 - 17 и 19, 20, обладают в 1,5 - 2 раза большим, по сравнению с прототипом, размером частиц, что и обуславливает соответственно большую скорость протекания через них растворителя.Формула изобретения1. Способ получения оксиапатита, включающий эквиобъемное смешивание раствора хлорида кальция с гидрофосфатом натрия с последующим превращением осажденного брушита в оксиапатит путем нагревания осадка в щелочном растворе, отличающийся тем, что, с целью повышения адсорбционной емкости по ДНК, смешивание ведут при молярном отношении кальция к фосфору, равном 0,7 - 0,9, причем используют или раствор гидрофосфата натрия, или суспензию, полученную путем добавления раствора хлорида кальция к избытку гидрофосфата натрия, а нагревание ведут в растворе гидрофосфата калия.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью увеличения размера кристаллов оксиапатита, после смешивания раствора хлорида кальция и суспензии, полученной путем добавления раствора хлорида кальция к избытку гидрофосфата натрия, проводят смешивание растворов хлорида кальция и гидрофосфата натрия при молярном отношении кальция к фосфору, равном 1,10 - 1,25.1503875 Емкость по ДНК, мг/мл МолярноеотношеСкоростьпротекания,мл/ч Пример ниеСа/Р 20/48" 12/19 6/9 81 68 75 71 51 21 (47)42 21 15 180 172 243 142 128 122 185 130 прототип 1,0 1 0,8 1,52 0,9 23 0,98 3,14 0,8 1,055 0,8 0,856 0,8 0,977 0,9 0,958 0,98 1,029 0,7 1,4510 0,7 1,311 0,6 1,6212 0,6 1,713 1,16 0,4514 1,16 0,4715 1, 16 0,4116 1,28 0,4317 1,05 0,4518 1,40 0,4919 1,23 0,4720 1,09 0,44 120 0,13 Скорость протекания после пятидекантаций осадка.Молярное отношение Са/Р в примерах 13-20 на второй стадиисмешивания,Составитель Т. ЧиликинаТехред И. Верес Корректор Т. Малец Тираж 486 Подписное Редактор М. Товтин За каз 5178/10 ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 415 Производственно-издательский комбинат Патент, г. Ужгород, ул. Гагарина, 1 О 1