Способ определения гепарина в крови

СО)ОЗ СОНЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9) (11) а)4 С 01 М 3348М ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(56) Справочник по клиническим лабораторным методам исследования./Подред,проф.Е.А.Коста - М.; Медицина,1975, с. 104-105.(57) Изобретение относится к медицине, предназначено для раннего выявления нарушений противосвертывающейсистемы крови, связанных с изменением величины реэервного внутриклеточного гепарина, способного выделитьсяв кровоток у больных с различнойпатологией. Цель изобретения - повышение точности способа эа счет выявления резерва гепарина в клетках крови, Для этого пробу венозной кровиобрабатывают лактобактерином в концентрации не менее 0,33 мг/мл, отделяют плазму инкубированием и центрифугированием. Затем добавляют раствортромбина и измеряют время свертыванияплазмы в сравнении с контролем. Разница во времени указывает на количество свободного гепарина в крови,Изобретение относится к медицинеИ может быть использовано для раннегоВыявления наруп 1 ен 11 Й противосвертываюЩей системы крот:,и связанных с изме 5нением величины резервного внутриклеточного гепарина, способногофвыделиться в кровоток у больных с различной патологией (сердечно-сосудис:той системы, органов дыхания, почеки др.).Цель изобретения - повьш 1 ение точности способа за счет выявления резетва гепарина в клетках крови,Способ осуществляют слецующимобразом,.В две силиконированные пробирки0,3 мп раствора цитрата натрия(О, 11 М) набирают 3,0 мл венознойкрови, свобОДно вытекающей из иглы,и тщательно перемешивают трехкратнымпереворач 111 вянием пробирки прикрытой полиэтиленовой пробкой, В первуюпрсбирку добавляют 03 мл лактобакте рина н концентрации ",0 мгмл, во вто; рую 0,3 ип физиологического раствораи внов 1: пробирки т 1 цятельно перемеши, вак(т Пробирки помещают НЯ 30 мин втермостат пр 11 37 С, После инкубациипробирки с кровью центрифугируют при1 ООО Об,( мин в теч з (1 ие 1 .1 мин В ПОлученных Обр Язцэх плазмы и. рзой и Бт Орои ттробирок оттределяют содержаниегепаринЯ по методу Сттрмаи 3 Для это 1 О в яггютпц онную пробирку отмериНЯ 1 дт О, 0 . мт 1 Ь 1 зиологи(е "кого НЯст-во 1:О,( мп плазмы, Прооирку 110"лмс 1(;эь(т в ОД 5111 ую б;.Ию при 37,", р 1 ерез30 с грибяв 1; ют О, 1 мл рэ створа тромбина (про зводства (5.Яун,:1 сского пред 11 риятин б;ктериопогических препаратовпри Пау 1 нр-исс,т(едовательском институте э пидеми 0110 Г.1 и, микр оби Ол Огии игиг 11(Сны) н 1 сонш,ен(трац( О. 5 мг/мл иотмечают время свертывя 1(ия плазмы.Раствов тоомбнна в такой концентрацииД 011 жен с.нертывать 0 мп плазмы ЯДОрового чеповекя, разбавленной в0,05 мл физиологитеского раствора,за 30 с, В другую аггютяпионную про 50бИрКу ОтМЕрИВЯЮт 051 МЛ (П:яэ.н 1 Ы И005 мл раствора толуидинового синегов концентрации 1 мг/мл, Пробирку помещают в водяную баню при 37 С, через30 с ДООЯнля 1 с(т О,1 мл рабочето растдора тромбиня и отмечают время свертыв(яння плазмы,Разница во времени сверть 1 вания в первой и во вгорой яггютяционных про бирках указывает на количество;-дободного гепарина в крови,В плазме крови первой пробирки,куда был добавлен лактобактерин определяется величина всего геп ринакрови, участвующего в регуля ии состояния противосвертывающей системыгемостаза, а в плазме крови второйпробирки (без лактобактериана)величина свободного гепарина крови.Разницу количества гепарина плазмыкрови первой и второй пробирок составит резервный внутриклеточный гепарин.Гепарин определяли двумя способами: известным (С.З.Сирмои) и предлагаемым.Одновременно ставили паракоагуляционные пробы; -нафтоловая проба по методу Сцп 1 п 11.пе Н., 1,уопв к.А, (1948 г), эталоновая проба по методу Вгееп Р,А., ТЯ 113.э С.1 . (19 б 9 г), общий фибриноген по Р,А.Рутбергу (19 б 1 г), записывали тромбоэластограмму на приборе "ГемокоагулографГКГМ 4".П р и м е р 1, Исследовали кровьздоровой женщины 25 лет, Величинагепарина плазмы, определенная по известному способу, составили 4 с, аплазмы, полученной из крови, подвергнутой действию лактобактерина 7,4 с. Следовательно, величина всего гепарина крови. определяющего состояние противосвертывающей системы, равна 7,4 с, количество свободного гепаринас, а содержание резервного внутри- клеточного гепарина 7,4-4 = 3,4 с,Паракоагуляционные пробь 1 быпи отрицательными, величина общего фибриногена составила 2,7 г/л, время К тромбоэластограммы б мин 38 с.П р и м е р 2, Исследовали кровь больного 63 лет с диагнозом: ишемическая болезнь сердца, стабильная стенокардия напряжения 2 функционального класса, Н ст, Величина гепаринаплазмы крови, не подвергнутой действиюлактобактерина, составила 4,2 с, анплазмы, полученнои из крови, подвергнутой действию лактобактерина, 11 с, Следовательно, величина всего гепарина крови, участвующей в регуляции состояния протиьосвертывания, будетравно 11 с, свободного гепарина крови4,2 с, а резервного внутриклеточного11-4,2=б,8 с. Этанолова проба (одна и:-.парякоагуляционных проб) была положи з1429025тельной на 2 плюса, величина общего лагаемому сп:собу позволяет устацофибриногена составила 4,8 г/л, а вить активацию противосвертывающей время К тромбозластограммы 4 мин 45 с. системы за счет повыщеция синтезаИз приведенных примеров видно, вкутриклеточцого гепарина, что в сравнении со здоровым человекому больного (пример 2) наблюдалась ак- ф о р и у л а и з о б р е т е ц и я тивация свертывания крови: положительный результат этаноловой пробы, Способ опрсделеция гепарина в кровысокая концентрация общего фибрино О ви путем отделения плазмы, ццкубгццп гена, сокращенное время К тромба- ее при 3 С, добавления раствора тромэластограммы. Однако по величине сво- бина с последующим измерением времеци бодного гепарина, исследованного посвертывания плазмы в сравцеццц с известному способу трудно отметить контролем, о г л и ч г и щ н й с я изменение состояния противосвертывання,5 тем, что, с целью повьппеция точности кРови У больного: содержание гепарина способа за счет выявления резерва у больного не отличалось от такового гепарицг в клетках крови, перед оту здорового человека (пример 1), делением плазмы кровь обрабатываютОценка сОстОЯниЯ противосвертыва- лактОбактерицом Б еокЦецтргццц це ющей системы крови больного по пред- менее 0,33 мг/мц.Составитель А. АгуреевРедактор С. Пекарь Техред И,Дидык Корректор Л. Пг-.гйЗаказ 5118/41 Тираж 847 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и Открытий113035, Москва, Ж, Раушская цаб д, 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул, Проектная,