Способ оценки состояния симпатоадреналовой системы человека

(5 ности крови 4 ь ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(7) Харьковский научно исследовательский институт терапии(56) Методы клинической биохимии гормонов и медиаторов"/Под ред, В.В.Меньшикова. - М.; 1969, с. 160, (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ СИМПАТИ АДРЕНАЛОВОЙ СИСТЕМЫ ЧЕЛОВЕКА7) Изобретение относится к биохи, касается медицинских исследований для уточнения механизмов развя тия сердечно сосудистых заболеваний, связанных с нарушением обмена кате." холамииов, например адреиалина (А), норадреналина (НА), и повышения эф фектнвности лечения. Цель изобрете ния - повышение точности и специфичспособа, Для этого из пробы пациента отделяют эритроциты,трехкратно их отмывают в охлаж м.физиологическом растворе, доб8 10 мг ЭДТА к 1 2 мл эритроци р йвзвеси и экстрагируют катехоламины(А и НА) в 0,4 н.надхлорной кислотепри 0 С 31 мин. После отделения белого хлопьевидного осадка путем центрифугирования сливают полученный супернатант, доводят рН до 8,5, Проводятадсорбционную колоночнуюхроматографию, в качестве сорбента используяокись алюминия, Проводят элюцию кате холаминов, двукратно добавляя 3,5 мл 0,25 н,уксусной кислоты для полученияуксусно-кислого элюата и дальнейшего,окисления катехоламинов. Элюат окисляют ферроцианидом калия в фосфатномбуфере рН 4,2.6,2 для получения продуктов окисления А и НА. Измеряют4 цпооресценцию А и .НА, регистрируютразницу опытных и контрольных проб ипо их значениям судят о тяжести заболевания. 1 табл.Изобретение относится к биохимиич может быть использовано в медицинских исследованиях для уточнения механизмов развития сердечно-сосудистыхзаболеваний, связанных с нарушением5обмена катехоламинов, например адреналина (А), норадреналина (НА)и повышения эФФективностк лечения.Цель изобретения повышение точности и специФичности способа.Способ осуществляют следующим обраг омБерут 3 -. 5 мл крови из вены впредварительно охлажденные пробирки,содержащие 4-6 капель 6 Х-ного раствора этилендкаминтетраацетата натрия(ЗДТА). Отделявт плазму от эритроцитов путем центриФугирования (приколичестве оборотов, равных 1000 щ ,об/мин в течение 5 мин /. Проводяттрехкратную промывку зрктроцитов охлажденным Физиологическим раствором.Дсбавлявт 8-10 мг ЭДТА к 1-2 мл зритроцитарной взвеси и экссрагирувт кате"25холамины (А и НА) из мембраны эритроцитов в 13-14 мл 0,4 н,надхлорной кис:лоте при 0 С в течение 30 мин. Фильт"рувт полученный раствор добавляютпри постоянном перемешивании охлажденный 5 н,раствор углекислого калиядо значения рН среды 3-4.Отделяют образовавшийся белыкхпопьевидкый осадок путем центркФугк-:рования на холоде в течение 5 мин при3000 об/мин. Сливают полученный супер"35натант к доводят с помощью 1 н,раствора яжиака до рН 85. Проводят адсорбцконную колоночнув хроматограФию с использованием в качестве сорбента окиси алюминия полученного супернатанта в количестве 10 мл, Проводят элвцив катехоламинов путем двукрат ного добавления 3,5 мл 0,25 н.уксус ной кислоты для получения уксусно кислого элвата и дальнейшего окисле"45 ния катехоламинов, Доводят уксусно- кислый элват до рН 4,2 с помощью 1 н. раствора аммиака и окисляют Ферроци анидом калия в ФосФатном буФере рН 4,2 для получения продукта окисления адреналкна, Доводят уксусно-киспый элюат до рН 6,2 с помощьв 1 н.раствора аммиака и окиспявт Ферроцианкдом калия в ФосФатном буФере рН 6,2 дпя получения продуктов окисления А и НА. 55 Измеряют Фпворесценцкв А на Флюори метре Бресо 1.-10 в уксусно-кислом элюате рН 4,2 при дпине волны возбуждения 436 нм и длине волны флюоресценции 550 нм, Измеряют суммарную Фпворесценцив А и НА в уксусно-кислом элвате прк рН 6,2. Регистрируют разницу опытных и контрольных проб, Определяют содержание А и НА по Формулама 107 10 5 458Е 1, 1000а О,О, 5 01 Е, 1 1000 где А - содержание ядреналика,нмоль/л;НА содержание НА норадреналина,нмоль/л;а - Флворесценция адреналина кнорадреналина соответственнов 1 мл измеряемой пробы ( вусловиях измерения показанияопытной пробы отнять контрольнуиЕ-Е - Флворесценция 1 нг адреналкна(Е) и норадреналина (Е ) в1 мл пробы (в условиях измерения выводится при калибровке прибора);10- количество супернатанта, пошедшее на адсорбент;7 - количество элвата;,0- количество элюата при окисленки;1000 - коэФФициент перевода нанограмм в микрограммы;5,458 и5,91 - коэФФицкенты пересчета в МСИ.В норме средние значения А и НАв эритроцитах равны 1,53+0,23 нмоль/ли 0,74+0,16 нмоль/л соответственно,У больных гипертонической болезньюТТ-й степени содержанке А в три разабольше и равно 4,58+0,38, НА в4,5 раза больше относительно нормы иравно 3,31.0,32 нмоль/л. У больныхИБС содержание А в эрктроцитах в4,4 раза больше относительно нормыи равно б,68+0,77, а НА - в 15 разбольше и равно 11,35+3,09 нмоль/л.П р к м е р . Обследован практически здоровый мужчина Б 21 г,направленный на проФилактический осмотр в рамках эпидемиологическогообследования. После исследования предлагаемым способом катехоламинов(А иНА) в эритроцитах получены значенияА 1,62 нмоль/л; НА 0,59 нмоль/л, апри исследовании базовым способом в,08 391 5 48-2,22 284 4,80 оставитель Н. Гуляеехред А Кравчук ректор Н.Король едактор И.иулл Тираж 8 акаэ 4425/45 дписно ственного комитета СССРобретений и открытий-35, Раушская наб., д,ВНИИПИ Госу по делам 113035, МоскваПроизводственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 плазме - А 2,10 нмоль/л; НА 4,72 нмоль/л. Заключение 1 в плазме результаты показателей для НА не укладываются в границы, определяемые как5 нормальные, В эритроцитах показатели находятся в границах, определяемых как нормальные.П р и м е р 2. Больной Б., 19 лет поступил в клинику с диагнозом погра яичная гипертония. После обследования больного предлагаемым способом получены значения А 1,81 нмоль/л; НА 3112 нмоль/л, а при обследовании больного базовым способом А 1,72 нмоль/л, 15 НА 4,96 нмоль/л.Заключение 1 в плазме результаты показателей укладываются в границы, определяемые как нормальные, увеличено лишь содержание НА, в эритроцитах 20 показатели отличаются от нормальных значений и укладываются в границы, установленные для группы больных (15 больных) с диагнозом пограничная гипертония, 25Осуществлена сравнительная оценка базового и предлагаемого способов путем обследования 25 доноров (здоро 84вые лица) и группы больных пограничной гипертонией (15 больных). Результаты представлены в таблице.Таким образом, совпадение с довери. тельными границами нормы и определяемой патологии предлагаемым способом по сравнению с базовым повышает точность исследования на 207. Способ оценки состояния симпатоадреналовой системы человека путем отбора крови, экстракции катехоламинов хлорной кислотой, отделения белка, нейтрализации, адсорбции на окиси" алюминия элюции уксусной кисло той с последующим окислением катехоламинов и флюориметрическим определением их содержания, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повыше ния точности и специфичности способа, в качестве биологического материала используют эритроциты, трехкратно отмытые физиологическим раствором, а экстракцию катехоламинов проводят 0,4 н,хлорной кислотой.