Способ определения активности лейкоцитов мочи

(19) (11 8 И 40 01 НИЯ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 6 ый медиФ, Портгосударствет невская и 0888)ое дел87-389 Медицина,ВНОСТИ медициедназ на- тарной Цель ости спо ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР . ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ21) 3938050/222) 26.07.8546) 15.07.88.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТЛЕИКОЦИТОВ МОЧИ(57) Изобретение относитсяне, точнее к иммунологии,чено для исследования фагоактивности лейкоцитов мочиизобретения - повышение то соба. Для этого из концентрированного осадка мочи выделяют лейкоцитарную суспензню, Полученную суспензию инкубируют в термостате 30-45 мин при 36-37 С. В качестве фагоцитируемого объекта используют стафилококк нли кишечную палочку. Бактерии опсонизи-. руют донорской плазмой, Затем бактерии осаждают центрифугированием (10 мин при 1500 об/мин), надосадок . удаляют, а бактерии ресуспендируют в физиологическом растворе Хенкса.до концентрациих 10 бактерий в 1 мп. Затем окрашивают мазок-каплют определяют фагоцитарный индекс и фагоцитарное число и по этим значениям оп.ределяют степень активности лейкоцитов мочи.Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, н может быть использовано для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов мочи.Цель изобретения - повышение точности способа.Способ осуществляют следующим образом.Лейкоцитарную суспензию получают путем центрифугирования 50-100 мп мочи средней порции.,(50 мп мочи может быть использовано для получения осадка у больных со значительной лейкоцитурией) в центрифужных пробирках в 15 течение 8-10 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют осадок сливают в одну пробирку. После двухкратного отмывания лейкоцитов физио", логическим раствором или раствором 20 Хенкса лейкоциты осаждают центрифугированием (10 мин, 1500 об/мин), надосадок удаляют, осадок ресуспендируют в питательной среде, например, 199 с добавлением 0,1-0,Я кедатина, в среде с целью умейьшения потери клеток вследствие оседания их на стенках посуды до концентрации 1 10 лейкоцитов в 1 мп.Формулу и количество лейкоцитов 10 подсчитывают известными методами. Полученную суспензию инкубируют в термостате в течение 30-45 мин при 36-37 С. В качестве фагоцитируемого объекта используют стафилококк или кишечную палочку. Использование в качестве объекта фагоцитоза кишечной палочки обусловлено ее ведущей ролью в этиологии ниелонефрита. Бактерии опсонизируют донорской плазмой (в равных количествах от пяти здоровых доноров забирают плазму после отстаивания крови в течение 1 ч, смешивают, разливают в пробирки по 1 мл и хранят при -70 ). Опсонизацию осуществляют следующим образом: на 1 мл плазмы добавляют 0,1 мл бактериальной взвеси 1 2 миллиардной культуры, приготовлен 50 ной с использованием ФЭК, ннкубируют в термостате при 36-37 С в течение 15-30 мин, Затем бактерии осаждают. центированием (10 мин, 1500 об/мин) надосадок уаляют, аю 5 бактерии ресуспендируют в Физиологическом растворе или растворе Хенкса до концентрации 1 10 бактерий вмп методом расчета разведения учн,тывая концентрацию исследуемой лейкоцитарной взвеси.Составление взанмодействующих смесей осуществляют в иммунологических планшетах при лейкоцитарно-микробном соотношении 1:100 (0,1 мл лейкоцитарной взвеси и 0,1 мл микробной взвеси), инкубируют в термостате в течение 30-45 мин при 36-37 С. Готовят мазок методом мазка - капли. Высушивают, Фиксируют метанолом 5-7 мин, окрашивают по Романовскому-Гимза (азур 11- эозин) 20-25 мин. Подвергают микроскопии с иммерсией известным способом. Подсчитывают количество фагоцитирующих лейкоцитов на 100 клеток (ФИ) и среднее количество фагоцитирующих микробов на один фагоцит (ФЧ), по которым судят об активности лейкоцитов мочи.П р и м е р 1, Больной С 25 лет, поступил в клинику с жалобами на частые. головные боли, быструю утомляемость, повьппение АД до 160/100 мм рт.ст., иногда незначительные боли в области поясницы, Считает себя больным в течение последних 4-5 лет, когда стало отмечаться повышение АД, при исследовании мочи патологии не выявлялось. При обследовании больного в клинике патологии со стороны общих анализов крови и мочи не выявлено, При посеве мочи истинной бактериурии не выявлено. По данным рентгенолагического исследования мочевой системы выявлена умеренная деформация чашечно-лоханочной системы обеих почек. При определении Функциональной активности лейкоцитов мочи ФИ = 501, ФЧ = 4,25 (нормативные показатели - доверительный интервал здоровых ФИ - от 60 до 907, ФЧ - от 9 до 16). Таким образом, наличие у пациента выявленных рентгенологически изменений почек свидетельствует в пользу хронического пиелонефрита, Отсутствие изменений со стороны общих анализов крови и мочи позволяет думать о фазе ремиссии. Однако снижение показателей активности лейкоцитов мочи (полученные результаты не вписываются в доверительный интервал здоровых) может свидетельствовать о готовнсоти к обострению пиелонефрита или о наличии скрытого воспалительного процесса. Больному показан курс противорецидивного лечения, включая иммуностимуляторы. После курса лечения .1409929 Составитель Е, КолмаковаРедактор И. Касарда Техред М.Дидык Корректор Г. Решетник Заказ 3474/40Тираж 847 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5(иммуномодуляция гемодеэом, ФИ =72 , ФЧ = 9) данные результаты вписываются в доверительный интервал здоровых.П р и м е р 2, Больная М, 48 л., поступила в клинику с жалобами на боли в поясните, изменение цвета мочи, слабость, утомляемость, субфебрильную температуру, Больна в течение 1 О лет. Диагноз хронического пиелонефрита подтвержден рентгенологическими и лабораторными исследованиями. Рецидивы заболевания возникают 2-3 раза в год, При определении активности лейкоцитов мочи ФИ = 22%, ФЧ ФЧ = 6,82Показатели не вписываются в доверительный интервал здоровых (ФИ - от 60 до 90 фу ФЧ - от 9 до 16). Проведен курс антибактериального и иммуностимулирующего лечения. При вы. Виске из клиники показатели общего анализа крови и мочи, пробы Нечипоренко - в пределах нормальных. Общее состояние больной удовлетворительное, однако снижены показатели активности лейкоцитов мочи: ФИ = 50 , ФЧ = = 7,12). Показатели не вписываются в доверительный интервал здоровых, что явилось показанием для продолжения курса иммуностимулирующей терапии (наступление клинической ремиссии не сопровождапось ремиссией иммунологической), Дополнительно проведен десятидневный курс лечения спленином.Показатели активности лейкоцитов мочи: ФИ = 67 , ФЧ = 8,99). Показатели вписываются в доверительный интервал здоровых, что может свидетелвствовать о наступлении иммунологической ремис-.сии и уменьшении вероятности рециди ва заболевания. Вероятно частые рецидивы заболевания как раз и обусловлены снижением защитных сил организма против инфекции мочевого тракта.Для профилактики рецидивов можно рекомендовать курсы иммуномоделирующей 15 терапии (показатели активности лейкоцитов мочи после лечения вписываются в доверительный интервал здоровых). Формула изобретения 20 Способ определения активности лейкоцитов мочи путем исследования ее осадка, о т л и ч а ю щ и Й с я тем, что, с целью повышения точностиспособа, иэ концентрированного осадка 25 выделяют лейкоцитарную .суспензию,.инкубируют в питательной срЕде .рН Б,5- 7,1 в течение 30-45 мин, после чего добавляют в пробу опсонизированные бактерии, окрашивают мазок-каппю,.30 определяют фагоцитарный индекс и фагоцитарное число и при значении,первого менее 60 и второго менее 9 микробных клеток определяют пониженную активность лейкоцитов мочи.