Способ получения иммунодиагностикума гепатита

(51)5 А 47/00 39/395 РЕТЕНИЯ ОП ТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ СТВУ(56). Инструкция по применениюднагностнкума. Институт эпидемии микробиологии им. Н,ф. Гамалеи42,14-(20-77)е(54) СПОСО КУМА ГЕПАТ (57) Иэобрне, точнее и касается диагностик ПОЛУЧЕНИЯ ИИИУНОДИАИТА Втение относится к мк иммунологии гепатспособа полученияума. Производят имнр а В, иммуно- нацию 4 ь Ю М Сл ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ носителя непрерывно-последовательнымперемещением в антисыворотке с титромсти-. :антител 1/8000-1/10000. В процессеови импрегнации производят одновременнопрокатку и перфорацию носителя подслоем антисывороткц при температуреОпоследней 3-5 С; Осуществляют сушку, иммуно" резку и герметическую упаковку импреологии гнированного носителя в эластичные ем"ТУкости в присутствии активного .влагопоглотителя, Элюцию требуемой дозыиммуноднагностикума производят с оп- ГНОСТИ- ределенного участка носителя, ограни-,ченного перфорацией. Способ. позволяетици- снизить себестоимость имуннодиагностикума н повысить точность его дозирова"ния путем повьвиения адсорбционной ем: кости носителяфИзобретение относится к медицине,а именно к иммунологии, и касаетсяспособа получения иммунодиагностику"ма гепатита В,Целью изобретения является повыше-5нне экономичности способа.П р и м е р. Ослицу весом 250 кгподвергают карантину (до 30 дней) иисследовэнию крови на бруцеллез, азатем прсиэводят кровопускание иэяремной вены крови в объеме 500 мл,для стимуляции иммунной системы.Че"рез 15 дней после стимуляции осуществляют подкожное введени в областиоколоушных, лопаточных и бедренныхлимфаТических узлов 250 мкг НВз-антигена с полным адъювантом Фрейнда(ПАФ) в .соотноше и 1:20 - всего 6 точек, Соединение НВз"антигена с ПЛФопроизводят при 37-40 С до получениястойкой водно-масгяной эмульсии.По достижении максимального титраантител, определяемого высокочувствительным иммунорадиометрическим методом (ориейтировочно по времеии через 15-16 дней), производят повторное кровопускание в объеме до 500 млс аналогичной целью и введение300 мкг антигена в 8 точках аналогичных областей лимфатических узлоз,:Лналогичным. способом определяют дости"жеьие максимального титра (ориентировочно по времени, через 15-16 дней),осуществляют стимуляцию забором крови в томже сбъеме и. введение 350 мкг 35антигена в 8 точках аналогичных областей лимфатических узлов, На этомпервый этап иммунизации животногозаканчивают, Достигаемый титр антител, определяемый методом встречногоиммуноэлектрофореза (ВИЭФ) составляет1/256,"атем после периода стабилизацийиммунной системы в течение 60 днейосуществляют второй этап иммунизацииживотного, включающий 3 последовательные стадии введения 150, 200 и250 мкг антигена в 4,6 и 8 точкахобластей лимфатических узлов в последовательности первого этапа иммунизацин (с промежуточным контролем максимального подъема титра н стимуляциейв тех же объемах крови), Относительное снижение объемов (количеств)вводимого антигена связано с уменьшением массы животного после введенияНАФ на первом этапе иммунизации. Наэгом второй этап иммунизации животного заканчивают. Достигаемый титр антител, определяемый методом ВИЗФ,составляет 1/ 1024- 1/2048.В связи с увеличением титра периодстабилизации иммунной системы удлиняется и достигает 200 дней, послечего осуществляют третий этап иммуни.,ации, включающий три последовательных стадии введения 200, 300и 250 мкг антигена в 6, 6 и 6 точкахобластей лимфатических узлов в последовательности первого .этапа иммунизации (с промежуточным контролем максимального подъема титра и стимуляции в тех же объемах крови). Приэтом при первом введении антигена(200 мкг) его соединяют с ПАФ в соотношении 1:10 (по методике первогоэтапа) и вводят в лопаточные лимфатические узлы животного.На этом иммунизацию животного заканчивают. Достигаемый титр антител1/8000-1/10000 (метод ВИЭФ),Но завершении этапа иммунизацииот животного забивают необходимоеколичество крови (до 1 л), центрифугируют и отделяют от форменных элементов. Часть отделенной сывороткив необходимом количестве помещают вванну с донным охладителем, поддерживающим температуру сыворотки в ин-тервале 3-5 С. В ванну опускают перфорирующее устройство с заправленнымк.онцом твердого носителя в виде ленточной фильтровальной бумаги (ГОСТ7584-77) и производят протягиваниеего с одновременной перфорацией и последующими сушкой при +20 С и резкойна мерные отрезки. Мерные отрезкиносителя, импрегнированного аитителами,ерметиэируют в эластичные .ем"костч пакеты) в присутствии активного поглотителя влаги. Оставшуюсячасть сыворотки хранят при -40 С.При полезной емкости ванны 125 смзи использовании при импрегнированииносителя 0,5 объема сыворотки числорабочих доз достигает 1 10Приготовление рабочего разведенияиммунодиагностикума гепатита В примассовых обследованиях осуществляютэлюированием антител, помещая мерныйучасток носителя в физраствор в соотношении 4 мл последнего на 1 см имопрегнированного носителя при 18-22 Св течение 30-40 мин, при этом мерныйучасток носителя регламентирован числом исследований,Формула изобретения Составитель С. МельниковаТехред М,Дидык Корректор В, Бутяга Редактор Т., Клюкина Тираж 541 . Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий. 13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Заказ 4334 еее ее еее ев е ев3140341Стоимость дозы, диагностикума составляет 0,00002 руб, в то время какпо известному способу стоимость дозы составляет 0,04 руб.5 Способ получения иммунодиагностику" ма гепатита В путем многократной иммунизации ослов очищенным НВ антигеВ ном, забора крови, получении,.сыворотве ки, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения экономичности, иммунизацию осуществляют трехстадийно с введением на первой стадии анти- гена с полным адьювантом Фрейнда в соотношении 1:20 в области околоушных, лопаточных и бедренных лимфоузлов в 6 точках, на второй и третьей стадиях - введением антигена в 8 точках аналогичнЫх областей лимфоузлов, при этом каждую последующую стадию / 54осуществляют после достижения максимального титра антител, повторную реиммунизацию осуществгяют соответственно через 60 дней в два трехстадийных этапа последовательным введением нарастающих доз антигена в 4,6 и 8 точках аналогичных лимфоузлов соответственно и через 200 дней последовательным введением возрастагогцнх количеств.антигена в 6,6 и 6 точках аналогичных областей лимфоуэлов,причем на первой стадии второго этапа дополнительно вводят антиген с пол-. ным едъювантом Фрейнда в соотношении 1; 10 в лопаточные лимфоузлы и . после достижения титра антител 1/8000- 1/10000 в реакции встречного иммуноэлектрофореза полученной сывороткой пропитывают бумажный носитель йри одновременной прокатке и перфорации его под слоем сыворотки при темпераотуре 3-5 С.