Способ определения криорезистентности эритроцитов

(51) ИЗЗ 4 НЫЙ КОМИТЕТ СССРОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ГОСУДАРСТ ПО ДЕЛАМ АН ОБРЕТЕНИЯ ским ива- лек- итыиобиологии и нко и двван(71) Институт проблемкриомедицины АН УССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КРИОТЕНТНОСТИ ЗРИТРОЦИТОВ(57) Изобретение относится кгии и медицине, может найтиние при низкотемпературном кровании эритроцитов. Цель изния - упрощение и ускорение Для этого эритроциты крови раэвв соотношении 1: 1000 физиологичр-ром, Полученнуюсуспензию смешют с 0,004 н. НС 1 в кювете фототроколориметра. Каждые 30 с отсчвают показатели по шкале экстинИзмерения ведут до поЛучениясовпадающих показаний. На оснопоказателей экстинкции производрасчет количества эритроцитовгемолизированных между двумя отами времени. Затем рассчитывнее время гемолиза эритроцитов0,004 н. НС 1, при его значении 55,6 мин определяют максимум криозистентности.1394129 Изобретение относится к биологии ,и медицине и может быть использованопри низкотемпературном консервировании эритроцитов.Целью изобретения является упрощение и ускорение способа оценки криорезистентности эритроцитов.Способ осуществляется следующим образом.10Эритроциты крови разводят в соотношении 1: 1000 физиологическим раст вором, 2 мл полученной суспензии , ,эритроцитов смешивают с 2 мл 0,004 н, ; НС 1 в кювете фотоэлектроколориметра, Каждые 30 с производят отсчет показаний по шкале экстинкции. Измерения ведут до получения двух совпадающих показаний. На основании полученныхзначений экстинкции производят рас чет количества эритроцитов( ), гемолизированных между двумя отсчетами времени по формуле-- 100%, (1) 25 1 с 1 Н НО-Н, йгде Но - начальное значение экстинкции,Н - конечное значение экстинкции; ЗОЙН- изменение экстинкции за 30 с,дСреднее время гемолиза эритроцитов в 0,004 н. НС 1 рассчитывали по формуле 35 1АМ- йс, (2)наболНгде С - время, отсчитанное от началагемолиэа, мин; 40 Б , - исходное количество эритроцитов в единице объема пробы(принимается за 1007.);ЙБ - количество эритроцитов, гемолизированных за время Йг. (7.), 5П р и м е р 1. Из флакона с кровью, взятой на "глюгицире", отбирают эритроциты, разводят их в соотношении 1:1000 физиологическим раствором. Затем в кювете фотоэлектроколориметра ФЭКМ смешивают 2 мл суспензии эритроцитов с 2 мл 0,004 н, НС 1. Каждые 30 с производят отсчет показаний при" бора по шкале экстинкции. Затем вычисляют среднее время гемолиза в растворе соляной кислоты11 мин (-1,57.)+1,5 мин100%+ 3, О мин 1, 57+3, 5 мин 1 д, 3% + . +4 мин 17,6%+4,5 мин 16,97+5,0 мин 15,47+5,5 мин, 2 КЬ,О мин 10,37+ +6,5 мин 8,8 +7,0 минф 5,1%+7,5 мин2,2%+8 мин 071 = 5,07 мин.Ошибка измерения г.=5%, т. е.5,07 мин + 0,25 мин.Эритроциты замораживают в контейнерах объемом 10 мл под защитой ограждающего раствора ЦОЛИПКПосле отделения плазмы к эритроцитам добавляют раствор ЦОЛИПК. После 15-минутной экспозиции эритроцитов с ограждающим раствором контейнер с эритроцитами погружают в ванну с жидким азотом. Оттаивание эритроцитов производят в водяной бане (45 С).Потери гемоглобина эритроцитами после замораживания-отогрева составляют 5,6+0,67, что свидетельствует о высокой криорезистентности эритроцитов.П р и м е р 2, Эритроциты донора исследуют аналогично примеру 1, Определяют среднее время кислотного гемолиза эритроцитов г.1- 1,5 мин(-1,47)+2,0 мин хо х 0 7%+25 мин 07%+30 минф 0% ++ 0,28 мин прогнозируется значение гемолиза (согласно установленной нами зависимости) в пределах от 5 до 87,Для подтверждения этого вывода эритроциты донора замораживают под защитой глицерина согласно методике.Потери гемолиза после замораживания-отогрева составляют 5,8+1,27, что подтверждает предварительный прогноз результата низкотемпературной консервации эритроцитов и свидетельствует о высокой криорезистентности эритроцитов. Формула изобретения Способ определения криорезистентности эритроцитов, включающий инкубацию суспензии эритроцитов в физиологическом растворе, регистрацию проницаемости мембран и о:,енку криореЗаказ 2216/41 Тираж 847 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 зистентности, о т л и ч а ю щ и й - с я тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, инкубируют суспензию зритроцитов в присутствии 0,004 н. соляной кислоты, регистрируют времягемолиэа эритроцитов и при его значении 5,0-5,6 мин определяют максимальную их криорезистентность.