Способ индикации простагландина е в биологических объектах

1343359 шенные срезы толщиной 20 мкм иэ не- фиксированной ткани селезенки помещали на столик люмынесцентного микроскопа МПс микрофлюориметрической приставкой ФМЭЛА. С помощью светофильтров микроскопа СС, ВС, СЗС и запирающего - ЖСвозбуждали люминесценцию исследуемого объек та, Из люминесценции внутрифолликулярнььх клеток, которые ставились в просвет зонда, с помощью интерференционного светофильтра 4 приставки ФМЭЛА выделяли световой поток с длиной волны 450 нм, Его интенсивность замеряли в условных единицах шкалы усилителя прибора (значение 1,) . Затем измеряли интенсивность светового потока с фильтра 5 пристав ки (460 нм) и получали значение 12 в той же точке, Далее рассчитывали 1значение отношения - . При наличии12ПГЕ значения отношения больше единицы, при отсутствии ПГЕ - равны 1 или меньше 1: В клетках интактных и 1 аблнца 1 Подопытные крысы Интактные крысы 1 фильтР 4 12 фильтр 12 1 50,21 0,63 3 0,64 1,93 0,48 1,5 0,84 0,96 1,14 0,70 1,04 0,33 0,73 1,02 0,56 0,32 0,73 фермент простагландинсинтетазу и уменьшать, вплоть до исчезновения, 50 уровень ПГЕ 2 в клетках, которые еговырабатывают. Были взяты 2 группы крыс по 5 крыс в каждой группе. 1 группа - всех крыс забивали беэ воздействия, интактные, 11 группа - 55 каждая крыса получала подкожнуюинъекцию метиндола в дозе 0,4 мг на 1 крысу и через 20 мин животных забивали. Способ забоя в 1 и 11 группах - передозировка эфира. У крыс 1 Изобретение относится к областигистохимии и может быть использованодля определения простагландина Е 2(ПГЕ 2) в тканевых .структурах,Цель изобретения - повышение точности способа,Способ осуществляется следующимобразом.Препарат, исследуемый на наличиеПГЕ 2, помещают под люминесцентныймикроскоп, измеряют интенсивностьфлюоресценции с фильтрами, пропускающими свет с длиной волны 460 и450 нм, и при соотношении показателей интенсивности более 1 определяютналичие ПГЕ 2 в пробеСпособ позволяетопределить в относительных единицахналичие ПГЕ 2 в микроскопируемойклетке, выявить в относительньп единицах уменьшение или увеличение уровня исследуемого простагландина входе заболевания, лечения или экспериментального воздействия, констатировать полное исчезновение простагландина в объекте.П р и и е р 1Способ был применендля выявления ПГЕ 2 во внутрифолликулярных люминесцирующих клетках селезенки интактных крыс, а также укрыс после введения антигена. ВысуИэ табл, 1 видно, что через 4 сут после введения антигена в большинстве клеток значение 1, уменьшилось, при этом значения отношения -возрас1тали, что свидетельствует о повышении уровня ПГЕ 2 ВО Внутрифолликулярных клетках селезенки после антигенного воздействия на организм.П р и м е р 2. Лекарственное вещество метиндол (индаметации) известно своим свойством блокировать подопытных животных встречались разныеварианты значений, что вызвало необходимость вычисления среднеарифметических значений, Результаты пред"ставлены в табл. 1. 1 Фильтр 12 Фильтр 12 / , 4 51343359 Таблица 2 Группакрыс/1,12 0,67 1,8 0,35 0,95 0,76 0,8 Составитель НГуляеваТехред А.Кравчук Корректор М. Демчик Редактор В, Данко Тираж 776ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Подписное Заказ 4819/47 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. 11 реектвая, 4 и 11 групп извлекали вилочковую железу (тимус), резали ее на криостате, монтировали и сушили срезы напредметных стеклах, микроскопировали.Микроскопическое исследование проводили на люминесцентном микроскопеЛюмамс микроспектрофлюориметрической насадкой ФМЭЛА. Объектом исследования явились аутолюминесцирующие премедуллярные клетки тимусныхдолек.Каждую клетку сначала подводят кзонду (затемненный кружок) в центреполя зрения. Затем от нее последовательно проводят замеры светового потока с интерференционными светофильтрами, сначала фильтром 4, потомфильтром 5. Показания в условныхединицах снимают с усилителя прибора У-6. Интактные и подопытиыеживотные забиты в один день, замерыпроведены на одном приборе при полной идентичности всех параметров,Вычисляют средние арифметические значения для 14 и 1 , затем подсчитывают среднее значение для отношения121у интактных крыс и крыс котоУрым вводили метиндол (группа 11), Уживотных с блокированной простагландинсинтетазой (группа 11) отно 1шение -в среднем оказалось меньше1,1. В группе 1 - у интактных живот 35ных -- больше 1 (табл. 2),1 Таким образом, искусственное снижение уровня ПГЕснижает и числовое значение отношений 1 /1, .Изобретение позволяет повысить точность определения ПГЕза счет объективизации способа. формула и з о б р е т е и й я Способ индикации простагландина Е в биологических объектах путем облучения объекта светом в коротковолновой области с последующей регистрацией люминесценции, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, исследование проводят под люминесцентным микроскопом, измеряют интенсивность флюоресценции,с фильтрами, пропускающими свет с длиной волны 460 и 450 нм, и при соотношении показателей интенсивности более 1.определяют наличие простагландина Е в пробе,