Способ моделирования функциональных сдвигов ультраструктур клетки

(19) 111) 1) 4 а О 1 Н 1ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Институт клинической и экспернментальной медицины СО АМН СССР(56) Физиология терморегуляции. Л,Наука, 1984, с. 433-461,54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СДВИГОВ УЛЬТРАСТРУКТУР КЛЕТ(57) Изобретение относится к экспериментальной медицине, Цель изобретения - воспроизведение стрессорнообусловленных сдвигов, Определяютконцентрацию катехоламинов, глюкокортикондов и липопротеидов в крови животных после воздействия стресса,Инкубируют тканевые срезы в среде,включающей глюкокортикоиды, адреналин и один из классов липопротеидов.Прн этом наблюдают повьппение свободной активности лизосомных ферментов,траслокацию лизосом в околоядерноепространство и снижение соматическойустойчивости лизосом, 2 табл, 1343285Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для исследования молекчлярных механизмов стресса.Целью изобретения является воспроизведение стрессорно-обусловленных сдвигов,Определяют концентрацию катехоламинов, глюкокортикоидов и липопротеидов различных классон н крови стрессированных животных, дбавляя затем в среду в качестве адаптивных гормонов глюкокортикоидь и адреналин и один иэ классон липопротеидов в концентрациях, соответствующих модели п что. П р и м е р, Моделируст внутри- клеточные метаболические и ультра- структурные изменения, характерные для стресса, вызванного физической нагрузкой. Этот вариант стресса характеризуется значительным увеличением глюкокортикоидов и адреналина в крови, увеличением количества липопротеидов в сыворотке крови и сдвигом липопротеидного спектра в сторону преобладания липопротеидов высокой плотности (.11 ПВП) (табл, 1),Срезы печени крысы помещают в Кребс-Рингер-Бикарбонатный буфер, Инкубационную среду продувают газовой смесью, содержащей 957 О, и 5, СО, Инкубацию производят в закрытых колбах объемом О мл при 37 С при постоянном покачивании в течение 30 минили 2 ч, Перед началом инкубации к срезам добавляют адреналин, гидрокортизон и липопротеиды высокси плотности, 0,1 Е-ный раствор здрецалина разводят физиологическим раствором в 100 раэ и добавляют к инкубируемым срезам из расчета 0,1 мл/5 мл среды. Конечная концентрация адреналина 10М. Гидрокортизон растворяют в диметилсульфоксиде (3 мг/мл) и разводят в 100 раз физиологическим рас - вором, Полученный раствор добавляют к срезам из расчета 0,1 мг/1 мл среды, Конечная концентрация гидрокортизона в среде Зх 10 М, Липопротеиды добавляют по 0,1 мг белка/ мл среды.После окончания инкубации срезы отмывают от среды холодным физиологическим раствором и в дальнейшем ис пользуют для оценки состояния метаболизма и ультраструктур печеночных клеток, Инкубация срезов в указанной1 О15 О методами показана полная идентичность изменений лизосомного аппарата нече- ночных срезов, инкубированных в течение ЗО мин в присутствии гидрокортизона, адреналина и сывороточных липопротеидов высокой плотности, тем изменениям, которые наблюдаются в печени животных, стрессированных интенсивной физической нагрузкой, В обоих случаях наблюдают повышение свободной активности лизосомных ферментов, снижение сомотической устойчивости лизосом, транслокацию лизосом в околоядерное пространство и повышение активности лизосомных ферментов в ядрах гепатоцилов, Этого не удавалось получить, если из инкубационной среды исключали ЛПВП,Так же, как и при физической нагрузке, 2-часовая инкубация печеночных срезов с гидрокортизоном, адре 5 ЗО35 40 налином и ЛПВП сопровождается резкой активацией биосинтетических процессов, При этом более, чем в 2,5 раза возрастает скорость включения "фС- аминокислот в растворимый белок печени и Н-уридина в РНК, в 1,5 раза3увеличивается скорость синтеза липопротеидоь низкой и очень низкой плотности в гепатоцитах, возрастает активность ключевого фермента пентозоаясфатного цикла - глюкоэо-фосфатдегидрогеназы (табл. 2)Все эти явления не наблюдались или были выражены в 2-4 раза меньше, чем в инкубационную среду добавляли лишь 45 50 55 среде в течение 3 ч не сопровождаласьпотерей растворимого белка, а такжеснижением активности ключевых ферментов гликолиза и гликогенолиза,что свиде 1 ельствует о хорошем сохранении жизнеспособности тканевых сре-зов,В печеночных срезах исследуютфункциональное состояние лиэосомального аппарата, скорость биосинтетических процессов, активность ферментов пентозофосфатного пути и некоторые другие показателиПолученныеданные сравнивают с результатами аналогичных исследований, проведенныхна печени крыс, у которых стресс вызывали интенсивной физической нагрузкои (плавание в течение 3,5 ч с грузом, составляющим 4 Х от массы тела,спри температуре воды 32-34 С). Биохимическими и гистохимическимиодин гидрокортизон или один адреналин, или гидрокортизон с адреналином. Формула изобретения юших модели п ч 1 чо. Таблица ЛПОНП, 7. ЛПНП, : ЛПВП, 7 Суммарнаяфракция ЛПОНПи ЛПНП, мг/л Условия опытов 0,023+0,002 0,096+0,005 0,042+0,005 7,73+0,62 Интактные животные" Достоверное отличие от контроля (Р ( 0,05), ЛПОНП - липопротеиды очень низкой плотности, ЛПШ 1 - липопротеиды низкой плотности; ЛПВП - липопротеиды высокой плотности; концентрацию липопротеидов в крови определяют электрофоретическим методом,Таблица 2 Условия опытов Свободная активность, 7, от общей активности ферментов Г-ФДГ, нмоль/г белка за 1 мин Включение меткив белок КФ Кат,Д Контроль (интактные животные)+Кат,Д - катепсин Д; Г-Ь-ФДГ - глюкозо-фосфатдегидрогенаэа; ГК+А+ЛПВП - гидрокортизон + адреналин + липопротеиды высокой плотности,ВНИИПИ Заказ 4815/43 Тираж 776 Поддисное Произв,-полигр, пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Способ моделирования функциональных сдвигов ультраструктур клетки путем перфуэии органа или инкубации тканевых срезов в среде, содержащей адаптивные гормоны, о т л и ч а - ю щ и й с я тем, что, с целью воспроизведения стрессорно-обусловленных сдвигов, предварительно определяют концентрации катехоламинов, глюкокортикоидов и липопротеидов различных классов в крови стрессированных животных, после чего инкубируют срезы в среде, содержащей в качестве адаптивных гормонов глюкокортикоиды и О адреналин и один иэ классов липопротеидов в концентрациях, соответству