Способ определения жизнеспособности неполовозрелых форм цестод

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 19) 1 В 10/00 ЕТ СССРОТКРЫТИЙ РЕТЕНИЯ ТВУ ИДЕ ющеихСпоосв ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КО ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИ ОПИСАНИ А ВТОРСНОМ(53) 541.124.7:542.97(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР У 1093324, кл. А 61 В 10/00, 1984.Бйу 1 Ь Г,Р. Культивирование протосколексов ЕсМпососсця дгапи 1 ояця до стробилярной стадии. 1967, т, 57, с, 111-133.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ НЕПОЛОВОЗРЕЛЫХ ФОРМ ЦЕСТОД (57) Изобретение относится к ветеринарии, а также может быть использовано в медицине. Цель изобретения - повьппение точности способа, его упрощение и ускорение. Проводят предварительную обработку неполовозрелых форм цестод 0,2%-ным водным раствором ,едкого калия или 2%-ным водным раствором соляной кислоты, затем инкубируют в активизирующем растворе, содержащем панкреатин медицинский, соду пищевую, желчь овечью и дистиллированную воду при температуре окружай среды от 47 до 178 С, выдерживая при этих температурах 5-180 с.соб позволяет достигнуть 100%-ного обождения яиц от оболочек, 100%-ной подвижности онкосфер, а также 100%-ной подвижности и выворачиваемости протосколексов цестод.Изобретение относитгя к ветеринарии, в частности к способам определения жизнеспособности яиц и личинокгельмиггов, а также может быть использовано в медицине.Цель изобретения - повышение точности способа, его упрощение и ускорение,Способ осуществляют следующим об в 10разом.П р и м е р 1. Для активизациияиц цестод применяют 0,2 Е-ныл водный раствор едкого калия или 27.-ныйводный раствор соляной кислоты и актпвизирующий раствор, имеющий следую.щий состав пищеварительных ферментовна дистиллированной воде, г, %, панкреатин медицинский 2, сода пищевая 1,3, желчь овечья 20, Растворрекомендуется использовать не ранеечем через 2 ч после приготовления,Лктивность его сохраняется 10 ч прикомнатной температуре и 36 ч при хранении в холодильнике при температур 2овоздуха 5-7 С,Зрелые членики цестоды М. пи".,. -серз с помощью препаровальных иглосвобождают от яиц, к яйцам добавляют воду и получают суспензию яиц,30хранящуюся в холодильнике в Физрастоворе при температуре воздуха 5 С.На предметное стекло с лункой помещают с 1 каплей воды 100-150 яицМ. шц 111 серз, затем вливают 1 каплю27.-ного водного раствора соляной кислоты и ставят в термостат при температуре воздуха +62 С. Через минопробу достают и добавляют в нее бкапель активизирующего раствора и40снова помещают в термостат при тоиже температуре на 2,5 мин, Затемпробу достают и смотрят под микроскопом (объектив8, окуляр 15) на наличие освободившихся. от оболочек онкосфер и их подвижности. При данном способе освобождается от оболочек 1007. онкосфер подвижность их 1007.-ная.В качестве контроля берут пробу с ц яйцами М, шц 1 С 1 серв и подвергают воздействию 0,27.-ного водного раствора ецкого калия или 27,-ного водного раствора соляной кислоты и вместо активизируюцего раствора вливают 6 капель физраствора, па аналогии с опытной группой инкубируют в термостатеопри температуре воздуха +62 С с экспозицией 2 и 2,5 мин, после чего иг следуют под микроскопом. В результате действия раствора 1 яйца были слегка потемневшими, онкосфер не обнаружено.П р и м е р 2, Зрелые яйца М, шп 1.1.сера помещают на 2 предметныхстекла с лункой (по 40-60 экземпляров. В одну пробу вливают поочередно 1 каплю 27-ного раствора солянойкислоты, затем инкубируют в термостате, добавляют 5-6 капель активизируюц 1 его раствора и снова помещают притой же температуре с экспозицией 13 мин, после чего пробы снова достают из термостата и смотрят под микроскопом. Пробы помещают в термостатсоответственно при следующих темпео,ратурах воздуха: 47 С - с экспозициоей 2 и 3 мин; 54 С - 2 и 3 мин; 83 С 2 и 1,5 мин, 84 С - 2 и 1,5 мин;107 С - 1 мин,Результаты показали, что начинаяос 59 С до 84 С при соответствующейэкспозиции вылупляемость и подвижность яиц цестод 1007-ные. П р и м е р 3. Для инкубации протосколексов цестод применяют тот же активизирующий раствор пищеварительных ферментов.На предметное стекло с лункой вливают с 1-2 каплями суспензии протосколексов эхинококков (40-60 экземпляров) при комнатной температуре воздуха, зародьппевые капсулы с протосколексами разрывают с помощью препаровальных игл. Добавляют 5-6 капель активизирующего раствора и помещают предметное стекло в термо, остат при 62 С на 1 мин, Затем пробу вынимают из термостата и смотрят под микроскопом МБС (объектив 2 и 4, окуляр 8, на наличие подвижных и вывернутых протосколексов.При данном способе активно двигается и выворачивается 100/ протосколексов эхинококков.В качестве контроля берут часовое стекло с 1-2 каплями (40-60 экземпляров) заведомо мертвых протосколексов, Убивают их путем нагревания часового стекла на спиртовке в течение 1-2 мин до кипения. Затем г пробу вливают 5-8 капель активизирующего растворао и помещают в термостат при 62 С на 1 мин 5 с. Затем пробу. вынимают и смотрят под микроскопом. В результате отмечается отсутствие подвижных и вывернутых протосколексов.1337057 Формула изобретения Составитель Е.Дмитриченко Редактор Л.1 ежнина Техред Л.Олийнык Корректор Л.БескидТираж 594 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5 Заказ 4068/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул, Проектная, 4 П р и м е р 4. На предметное стекло с лункой помещают с 1-2 каплями суспензии 40-60 протосколексов эхинококков, вливают 5-8 капель активизи 5 рующего раствора и ставят в термоостат при +178 С на 5 с, после чего пробу смотрят под микроскопом. По данному способу достигаются 1003-ные подвижность и выворачиваемость прото сколексов,В качестве контрольной пробы 1 берут предметное стекло с лункой, помещают туда с 1-2 каплями суспензии 40-60 заведомо мертвых протосколексов эхинококков, убитых кипячением. Затем вливают в лунку активизирующий раствор и пробу ставят в термостатопри +178 С. Через 5 с предметное стекло с лункой достают из термостата и протосколексы наблюдают под микроскопом на подвижность. В результате в пробе 1 протосколексы деформированы и неподвижны, подвижных и вывернутых экземпляров не найдено, 25В качестве контрольной пробы 2 берут предметное стекло с лункой, помещают туда 40-60 экземпляров протосколексов, заливают Физраствором и ставят в термостат при +178 С. Через 5 спробу вынимают иэ термостата и смотрят под микроскопом. В результатев пробе 2 протосколексы остаются безизменения, подвижных и вывернутых экземпляров не обнаружено. Предлагаемый способ можно применять в лабораторной практике для определения максимального срока выживаемости яиц цестод во внешней среде, а так же для культивирования ларвальных стадий цестод,Способ определения жизнеспособности неполовозрелых Форм цестод, включающий предварительную обработку их водным раствором едкого калия или соляной кислоты с последующей обработкой активизирующим раствором и. инкубацию, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, его упрощения и ускорения, инкубацию проводят при температуре окружающей среды от 47 до 178 С в течение 5-180 с.