Способ определения простагландинов

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к способаманализа водных растворов физиологически активных соединений кислотнойприроды - простагландинов - методомвысокоэффективной жидкостной хроматографии, и может быть использовано вмедицинской, фармацевтической, химической промышленности и биотехнологии,Цель изобретения - упрощение и повышение точности способа.Способ осуществляют следующим образом. 16К анализируемой пробе, содержащейпростагландины в количестве от 30 кгдо 100 мкг, прибавляют метанольныйраствор тетрафениларсония или фосфония хлорида, или тетрапентил-тетрагексиламмония бромида, или триоктилметиламмония иодида (ТОМАИ), устанавливая их концентрацию в смеси 0,632,5 мМ, Из полученной смеси простагландины экстрагируют 30-70 мИ раствором 4-бромфенацилбромида в хлористом метилене. Объемное соотношениеанализируемая проба - экстрагент1:0,58-0,42. Полученный экстрактанализируют на колонке (4,6-250 мм)с сорбентом Ультрасфер(5 мкм)в потоке подвижной фазы метанол -вода (80:20 об/об) при расходе последней 1 мл/мин. Детектирование придлине волны 260 нм.35П р и м е р 1 К 0,6 мл растворапростагландинов ПГЕ, ПГФ, ПГДПГА и ПГБ, растворенных в количестве по 8 мкг каждого в фосфатном илитрис-НС 1 буфере (50 мМ, рН 8,0), при- л 0бавляют 15 мкл 0,1 М раствора в метиноле тетрафениларсония хлорида (ТФАХ),устанавливая содержание последнего всмеси 1,6 мМ. К полученной смеси прибавляют 0,3 мл,экстрагента представляющего собой 50 мИ раствор 4-бромфенацилбромида в хлористом метилене(объемное соотношение анализируемаясмесь - экстрагент 1:0,5), смесьвстряхивают в течение двух мин, даютсмеси расслоиться и 10 мкл органической фазы вводят в жидкостный хроматограф, снабженный колонкой с сорбентом Ультрасфер-ОВЯ зернением 5 мкм,В качестве подвижной фазы используютсмесь метанол - вода (80:20), объемныйрасход которой равен 1 мл/мин. Времяудерживания ПГЕ 16, ПГД 17,5, ПГФ19,5, ПГА 22,5, ПГБ - 24 мин. Погрешность определения содержания каждого из простагландинов не превышает 07П р и м е р 2. К 06 мл раствора ПГЕ в трис-НС 1 буфере (50 мМ, рН 7) прибавляют растворенный в метаноле ТФАХ, концентрация которого в полученной смеси составляет 0,63 мМ. Дальнейшее определение проводят аналогично примеру 1 с получением идентичного результата,П р и м ер 3, В анализируемой пробе по примеру 2 концентрация ТФАХ составляет 2,5 мМ. В условиях обработки пробы, аналогичных примеру 1, получен идентичный результат. П р и м е р 4, В условиях примера 1 анализируют смесь по примеру 2,используя в качестве соединения, дающего органический катион, тетрафенилфосфоний хлорид (ТФФХ), концентрациякоторого в смеси 0,63 мМ, Результатидентичен результатам примера 1.П р и м е р 5. Проводят анализпростагландинов аналогично примеру 1с применением ТФФХ при его концентрации 1,6 мМ. Результат аналогиченполученному в примереП р и и е р б. В условиях анализа по примеру 1 концентрация ТФФХсоставляет 2,5 мМ. Результат аналогичен результатам полученным в примерах 1-5,р и м е р ы 7-9. Анализ проводят, используя в качестве растворителя для простагландинов трис-НС 1буфер (50 мИ, рН 9,0), а в качествевещества, дающего органический катион, тетрапентиламмоний бромид(ТПАБ), устанавливая его концентрацию в растворе или О, 63, или 1,6, или2,5 мМ, Во всех случаях результатидентичен полученным в примерах 1-6.П р и м е р ы 10-12, ПГФ , растворенный в К-фосфатном буфере (50 мИ,рН 7), определяют в условиях примера1-9 с применением тетрагексиламмонийбромида (ТГАБ) при его концентрации0,63, или 1,6, или 2,5 мМ, Результатаналогичен полученному по примеру 1.П р и и е р ы 13-15, ОпределениеПГД , растворенного в К-фосфатномбуфере (50 мМ, рН 9,0), проводят вусловиях примеров 1-12, используяТОМАИ при его концентрации в смеси0,63, или 1,6, или 25 мМ. Результатаналогичен полученному в примере1334075 СоставительС. ХованскаяТехред Л,Сердюкова Редактор А. Огар Корректор А, Тяско Тираж 776ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Ю Заказ 3958/42 Подписное Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 П р и м е р ы 16-25. В условиях примера 1 определение проводят с при менением или ТФАХ, или ТФФХ, или ТПАБ или ТГАБ, или ТОМАИ при их концентрации в смеси 0,3 или 5 мМ (запредельные значения). Ошибка определения простагландинов превышает 107П р и м е р 26. Определение простагландинов проводят в условиях примера 1 при концентрации раствора 4- бромфенацилбромида в хлористом мети- лене 30 мМ. Результат идентичен полученным в примерах 1-15.П р и м е р 27. В условиях анализа по примеру 1 и аналогичном составе анализируемой смеси концентрация 4-бромфенацилбромида в хлористом метилене равна 70 мМ. Результат идентичен полученным в примерах 1-15,26.П р и м е р ы 28-29, В условиях примеров 1-15 определение ПГА про 2 водят при концентрации раствора 4- бромфенацилбромида 20 или 100 мМ (запредельные значения). Ошибка определения превышает 107.П р и м е р ы 30-33, В условиях примеров 1-15 и проб аналогичного состава проводят определение простагландинов, используя в качестве растворителя для 4-бромфенацилбромида или хлороформ, или тетрахлорид углерода, или этилацетат, или гексан, В ходе анализа простагландины не определены,П р и м е р ы 34-35. Анализ проводят аналогично примерам 1-15 при соотношении анализируемая пробаэкстрагент 1:0,58 или 1:0,42. Результаты аналогичны полученным в примерах51-15 26,П р и м е р ы 36-37. Анализ проводят аналогично примерам 1-15 присоотношении анализируемая пробаэкстрагент 1:0,17 или 1: 1,7. Ошибкаопределения превышает 10 Ж,Формула изобретенияСпособ определения простагландинов путем экстрагирования определя-емых вещаств из анализируемой пробыорганическим растворителем с последующей обработкой экстракта химическимреагентом и разделением полученнойсмеси на колонке, заполненной химически модифицированным силикагелем впотоке подвижной фазы, смеси органического растворителя и воды, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюупрощения и повышения точности спо соба, в качестве экстрагента используют 30-70 мМ раствор 4-бромфенацетилбромида в хлористом метилене приобъемном соотношении анализируемойпробы к экстрагенту, равном 1:0,420,58, экстракцию проводят в присутствии хлорида тетрафениларсония, илихлорида трифенилфосфония, или бромида тетрапентиламмония, или бромидагексиламмония,или иодида триоктилметиламмония при их концентрации всмеси, равной 0,63-2,5 мМ,