Способ определения активности сукцинатдегидрогеназы в биологических объектах

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 801 З 0184 1 бц 4 С 12 Ч 1 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ.04.8. Бенинградский инс Я АКТИВНОСТИВ БИОЛОГИЧЕСКИХ етение от скии научно-исслед титут радиационной изобретенияособа. В пробЙ ВОДОЙ Ве 10 ся ова, В.М,Ва и И,П.Стама 088,8) АЬоой 1с. 144-148 оточки ванн буфе натр ИЕ 1 К У очищ ную смесь,я и раство Бсп ируют и ют от бе вых растворяют в ацеторуют, Центрифугатрассчитывают актив л.(21) (22) (46) (1) вател гиги (2) А.Н. (53) (56) 1949 ныО.П.Иваоржавин612.015Кап Е.,т. 109 носится к медицине. повьппение точносрку с дистиллирокровь, фосфатную твор сукцината тразолия. Пробы фугируют. Осадок структур крови, е и центрифугиотометрируют и ость фермента.1301841 При измерении оптической плотности стандартных проб на спектрофотометре СФзависимость Р, от содержания формазана в стандартной пробе А оказывается линейной в интервале значений А. от 0 до 100 Мг/мл.При определении активности СДГ втканях вместо смеси 1 мл дистиллированной воды с. пробой крови исполь зуют 1 мл 5-10%-ного гомогената ткани. При этом операцию очистки продукта реакции от гемоглобина и белковыхструктур можно не производить, поскольку в спектре поглощения растворагомогената ткани спектр Сорета отсутствует. Расчет активности ферментапроизводят по формуле (1), в которойвегичину объема крови Ч заменяют навес (массу) ткани в 1 мп раствора 20 гомогецата в граммах. Величину активности в этом случае выражают вмоль//г мин,В таблице показано сравнение результатов определения активности СДГпо предлагаемому способу и способуКуна-Эбуда (известному), Анализ проводили в пробах ткани печени крыс. 0,480 0,450 0,5100,480 1,0701,110 А=: 1,18 А.ст 1, ОбО 1, 080 инк г М ср р моль/мл мин,где А, - содержание формазана в стандартной пробе, рг/мл;0 и 1) - оптическая плотность стандартной и исследуемой пробпри А = 475 нм;Ч -объем пробы крови, мл;1., - время инкубации при37-38 С, мин;М, - молекулярный вес формазана,Р г/ смоль1,18 - постоянный для предлагаемого55способа коэффициент, учитывающий потери формазана. прицентрифугировании,Изобретение относится к медицине,касается измерения фермецтативнойактивности сукцинатдегидрогеназы(СДГ) и может быть использовано приисследованиях влияния различных факторов окружающей среды на организмчеловека и животныхЦелью изобретения является повышение точности за счет дополнительнойочистки продукта реакции с помощьюцентрифугирования с последующим растворением полученного осадка в ацетоне.Способ осуществляют следующимобразом.В пробирку с 1 мл дистиллированной воды вносят 0,2 мл крови и по1 мл О, 15 М раствора фосфатной буферной смеси, 0,2 М раствора сукцината натрия и 0,1%-ного растворатетразолия, Пробы инкубируют при37-38 С в течение 60-90 мин. Продуктреакции отделяют от инкубационнойсреды путем центрифугирования пробпри 3000 минв течение 15 мин, осадок промывают в 5-10 мл дистиллиро -ванной воды и центрифугированием втечение 5 мин при 3000 мин " очищаютот гемоглобина и других белковыхструктур крови, затем осадок растворяют в 5 мл ацетона и центрифугируютпри 3000 мин " в течение 3-5 минЦентрифугат, представляющий собойочищенный раствор формазана в ацетоне, фотометрируют, например, на спектрофотометре (3 т,= 475 нм),Активность фермента рассчитываютпо формуле Про-. Оптическая плотность проб приба определении активности СДГспособом Куна-Эбуда предлагаемым " Вследствие высокой оптическойплотности перед фотометрированием пробы разбавляли ацетоном в соотношении 1:4 (1 млпробы + 4 мп ацетона). Формула из обре те ния Способ определения активности сукцинатдегидрогеназы в биологических объектах, включающий их инкубацию с субстратом в присутствии тетразоля в буферной среде с последующим центрифугированием и фотометрическим1301841 4та реакции центрифугированием втечение 10-15 мин при 3000 об/мин споследующим растворением полученногоосадка в ацетоне,измерением продукта реакции, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, проводят дополнительную очистку продукСоставитель В. Месянжинов Техред В.Кадар Корректор И. Эрдейи Редактор С. Пекарь Заказ 1191/26 Тираж 500 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4