Способ определения состояния противокоревого иммунитета

(51)4 А 61 К 39 00 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ЛЬСТВ Н АВТОРСКОМУ М 32 . Т. Тихонова и Г. Даисследователь и микробиол ззез ч гу 1 цда Тюееп ц 1 цге 964, 1 1 гцз з 1 оп апд Сл ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(56) ХоггЬу Е.-Яерагаз 1 оп о гпесотропеп 1 ез Ьу едц 11 Ьпшп сепп СзС дгайеп 1 з. 3. Сгцде апде 1 Ьег 1 геа 1 ед сопсеп 1 га 1 ей 11 ззце с1 епа - АгсЬ. дез. ЧгцзгогзЬ., 1р. 306 - 318. Я 01175487 д(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ ПРОТИВОКОРЕВОГО ИММУНИТЕТА путем выявления специфических антигемолизинов в сыворотках крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, упрощения и сокращения времени исследования, выявление специфических антигемолизи нов осуществляют при 45-1 С в течение 1,5 - 2 ч в реакции задержки прямого гемолиза, при этом используют стабильный гемолизирующий антиген, полученный обработкой вируссодержащей жидкости твином-эфиром.5 1 О 15 20 25 Зо 35 40 45 50 55 Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для определения состояния противокоревого иммунитета у людей, больных и переболевших корью, у привитых коревыми вакцинами, а также у экспериментальных животных.Целью изобретения является повышение точности определения, упрощение и сокращение времени исследования.Способ осуществляется следующим образом.В реакции используют не живой вирус кори, а коревой гемолизирующий антиген,полученный из суспензии живых вирусных частиц путем обработки ее твином-эфиром по методу ХоггЬу, а контакт антигена исследуемой сыворотки и эритроцитов обезьян проводят в течение 1,5 - 2 ч при 45-(-1 С.При обработке твином-эфиром гемолитическая активность увеличивается в 10 - 20 раз по сравнению с исходной, в результате чего получают коревой антиген, обладающий способностью вызывать полный лизис эритроцитов обезьян, что является основой разработки нового способа определения состояния противокоревого иммунитета - реакции задержки прямого гемолиза (РЗПГ).Определение титра противокоревых антигемолизинов в испытуемой сыворотке проводят в РЗПГ с 2 гемолитическими единицами коревого антигена, с 5 Я-ной взвесью эритроцитов обезьян, при инкубации смеси при 45-1-1 С. Учет реакции осуществляется сразу же после наступления полного гемолиза в контроле антигена, представляющего смесь двух гемолитических единиц антигена и 5 Я взвеси эритроцитов обезьян. За титр антигемолизинов в испытуемой сыворотке принимают ее наивысшее разведение, вызывающее видимую задержку гемолиза по сравнению с полным лизисом в контроле анти- гена.По сравнению с прототипом в реакциизадержки гемолиза (РЗГ) разработанный способ определения состояния противокоревого иммунитета - РЗПГ, более прост в исполнении. Твином-эфиром обрабатывается исходная культуральная вируссодержащая жидкость, а не концентрированный вирус и, следовательно, исключается необходимость использования ультрацентрифуг. Учет результатов проводится визуально без применения спектрофотометров, что не только упрощает метод, но и существенно снижает время проведения исследований. Время, затрачиваемое на постановку и учет реакции, сокращается также за счет повышения температуры инкубации смеси антигена, исследуемой сыворотки и эритроцитов обезьян до 45+1 С, что позволяет уменьшить время контакта до 1,5 - 2 ч. Полученный гемолизирующий антигенстабилен и высоко активен, что повышает точность определения специфических антигемолизинов в сыворотках не менее чем на 10 Я. Так, при обследовании 198 детей в возрасте 6 - 10 лет, привитых живой коревой вакциной Л(ЖКВ Л) 3 - 8 лет назад, специфические антигемолизины выявлены в РГЗ (1) у 96 детей (48,4 Я), в РЗПГ у 127 детей (64,1 Я). При обследовании 52 детей в возрасте от 1 до 3,5 лет, не болевших корью и не привитых против этой инфекции, противокоре вые антигемолизины не были выявлены ни с помощью известного, ни с помощью разработанного способов. На 20 - 27 день после введения этим детям ЖКВ Лпротивокоревые антигемолизины выявлены в РЗГ в сыворотках 37 детей (71,1 Я), в РЗПГ у 43 детей (82 7%)Пример 1. Больная М., 19 лет, поступила в 1 КИБ г. Москвы с подозрением на корь (Юо истории болезни 5907). С целью подтверждения клинического диагноза больная обследована на 3 и 1 О день с момента появления сыпи. С помощью РЗПГ в первой сыворотке п ротивокоревые антигемолизины выявлены в титре 1:16, во второй - 1:512. Более чем 4-кратное нарастание титра противокоревых антител подтвердило правильность клинического диагноза. Пример 2. При обследовании В. Е.1975 года рождения до и после введения ЖКВ Лс помощью РЗПГ установлено, что до вакцинации ребенок не имел в крови противокоревых антигемолизинов, на 27 день после введения вакцины специфические антитела выявлены в титре 1:160. Результаты обследования свидетельствуют о формировании у данного ребенка поствакцинальной невосприимчивости к вирусу кори. Следовательно, предлагаемый способ позволяет оценить состояние противокоревого иммунитета при заболевании и вакцинопрофилактике. К настоящему времени с помощью данного способа обследовано 171 человек в возрасте от 1 г до 33 лет, больных корью, 67 человек в возрасте 45 - 60 лет, переболевших корью в раннем детстве, 296 человек в возрасте от 1 г до 16 лет, привитых ЖКВ Л, и 52 ребенка в возрасте от 1 г до 3 5 лет, не болевших корью и не привитых ЖКВ (контрольная группа), Всего исследовано 757 сывороток. Установлено, что заболевание корью и введение ЖКВ Лприводит к интенсивному синтезу противокоревых антигемолизинов, которые обнаруживаются в течение длительного периода времени после заболевания или вакцинации, Однако у 23 Я привитых противокоревые антигемолизины не выявляются через 4 - 6 лет после вакцинации, что свидетельствует о возможности утраты с годами1175487 Составитель Г. Крюкова Техред И. Верес Корректор М. Самборская Тираж 122 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 45 филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Редактор Т. Митейко Заказ 52476 поствакцинального противокоревого иммунитета у некоторых привитых детей,Таким образом, предлагаемый способ определения состояния противокоревого иммунитета позволяет выявлять иммунных и неиммунных к вирусу кори лиц среди разных контингентов населения, при этом отличается простотой и легкостью постановки и учета реакции, сокращается время проведения исследований, а получение стабильного активного гемолизирующего антигена увеличивает точность исследований не менее чем на 10 Я.