Способ получения 1-орнитина моногидрохлорида

СОЮЗ СОВЕТСКИХцццьлкпевникРЕСПУБЛИК ае ай ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(54) (57),СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Ь-ОРНИТИНАМОНОГИДРОХЛОРИДА путем выращиванияштамма-продуцента в питательной среде содержащей источник углерода и 4(51) С 1,2 Р 13/10 // С 12 Р 13/10: С 12 К 128 азота и стимуляторы роста, с последующим выделением целевого продукта из культуральной жидкости сорбцией на сульфокатионите КУх 8 в ИН форме и перекристаллизацией его;о тл ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода и чистоты целевого продукта, в качестве продуцента используют штамм Мдсгососсцз я 1 оСгаш- сиа 130-НА-МВ, выращивание осуществляют в питательной среде, содержащей, мас.й:Меласса 9-22 Кислотный гицролизатдрожжей (БВК) 4,5-15 Аммоний хлористый 0,1-10 Вода Остальное а выделение на сульфокатионите проводят в два этапа, при этом на первом этапе сурбцию культуральной жидкости проводят при рН 1,5-2,0, а на втором этапе - при рН 4,5 - 5,5Однако известные способы не обеспечивают высокого выхода и чистоты целевого продукта.Цель изобретения - повышение выхода и чистоты целевого продукта.Эта цель достигается тем, что согласно способу получения Ь-орнитина моногидрохлорида путем выращивания штамма-продуцента в питательной среде, содержащей источники углерода и азота и стимуляторы роста, с последующим выделением целевого продуктаЗО из культуральной жидкости сорбцией на сульфокатионите КУх 8 в Г 1 Н формеФ и перекристаллизацией его, в качестве продуцента используют штамм Мдсгососсцз 81 цгапасцз 130-НА-МВ, выращивание осуществляют в питательной среде, содержащей, мас.7:Меласса 9-22Кислотный гидролизатдрожжей (БВК) 4,5-15Аммоний хлористый 0,1-10Вода Остальное а выделение на сульфокатионите проводят в два этапа, при этом на первом этапе сорбцию культуральной жидкости проводят при рН 1,5"2,0, а на вто 45 ром этапе - при рН 4,5 - 5,5.П р и м е р 1, Готовят питательную среду, содержащую, 7.: маласса 10; гидролизат дрожжей (БВК) по аминному азоту 0,45; хлбристый аммоний 1; мел 2, при рН среды 7,2 - 7,4. Среду разливают по 10 мл в качалочные колбы Зрленмейера (250 мл) и стерилизуют, Колбы засевают продуцентом орнитина Мхсгососсцз ц 1 цгаппсцз55 130-НА-ГВ,выращенным на агаровом косяке из мясопептонного бульона. Ферментацию проводят на качалке при 40 Изобретение относится к микробиологической промышленности и касаетсяполучения Ь-орнитина моногидрохлорида,Известен способ получения орнитина 5микробиологическим путем в присутствии стимуляторов роста 111.Известен также способ полученияЬ-орнитина моногидрохлорида путем выращивания штамма-продуцента АггпгоЬасгег еьггецз 23-Ахв питательнойсреде, содержащей источники углеродаи азота и стимуляторы роста, с последующим выделением целевого продуктаиз культуральной жидкости сорбцией 15на сульфокатионите КУх 8 в Г 1 Н+ форме,и перекристаллизацией его 23 . о,31 С в течение 72 ч. Содержание орнитина в полученной культуральной жидкости 42 г/л.П р и м е р 2. В 1 л колбах готовят посевную среду, состоящую, г/л:кукурузная мука 30; меласса 30;поваренная соль 5. После стерилизации среду засевают штаммом продуцентаорнитина М, 81 цгаш 1 сцз 130-НА-МВ и культивируют 24 ч при 30 - 31,5 ОС,Конечный титр культуры 10 щ . Полученный посевной материал добавляют взаранее приготовленную и стерилизованную ферментационную среду следующего состава,7.: меласса 9; сернок.;слотный гидролизат БВК 4,5; аммонийхлористый 0,5. Пеногаситель синтетический (ПГ 1 С) - 0,1 л/7. (начальныйаминный азот 0,48 7 при рН 7,2 - 7,4),Ферментацию проводят в 1 м ферментерах (коэффициент заполнения 0,6).Продолжительность Ферментации при31 С 72 - 75 ч, аэрация 1:1, необходимое значение рН 7,2 - 7,4 в течение всего процесса ферментации поддерживается периодическим добавлением растворов минеральных кислот или оснований. В полученной культуральной жидкости активность орнитина 28 г/л. П р и м е р 3. Культуру М. 81 цгавдсцз 130-НА-ЯВразмножают в 1 м посевных ферментерах на мелассной питательной среде, содержащей, 7: меласса 5; сернокислотный гидролизат дрожжей (БВК) 4; аммоний хлористый 4. Основную ферментацию орнитина проводят в 16 м ферментерах в аэробных условиях при 31 С, рН среды 7,3 7,6 на питательной среде следующего состава,7: меласса 7 (по сахару);сернокислотный гидролизат БВК 10 (по азоту 0,487); хлористый аммоний 0,9. После стерилизации среду засевают культурой из посевного аппарата и проводят ферментацию. Продолжительность ферментации 72 - 75 ч. Концентрация орнитина в полученной 8,0 м культуральной жидкости 25 г/л, содержание сопутствующих аминокислотв сумме 10 - 2 г/л. Для отделенияаминокислот от неорганических ионов,красящих веществ и биомассы, культуральную жидкость подкисляют (около90 л) концентрированчой серной кислотой до рН 1,5 - 1,8 и пропускают через ионообменную колонку, заполненную 2,0 м ионнта КУх 8 в МНформе. При этом происходит практичес38413 467-687 содержания сухих веществ йкристаллизуют выдержкой раствора вкристаллизаторе при 5 - 7 С в течение 8 - 10 ч. Выпавшие кристаллы1-орнитин моногидрохлорида дигидратаотделяют на центрифуге и обезвоживают. Выход высушенных кристаллов85 кг. Полученный технический продукт хроматографически гомогенен по 10 орнитину, основное содержание - 983,удельное вращение +23,5(1 н НС 1, 5 Хный раствор), сульфатная эола 1,ОХ),Маточный раствор в количестве150 л и активностью орнитина 435 г/л 5 возвращают в цикл упаривания и кристаллизации, Общий выход на стадиивыделения - 753 с учетом возвратаматочного раствора. Составитель Г. Смирнова Редактор И.Дербак Техред М,Надь Корректор И. ЭрдейиЗаказ 10634/18 Тираж 525 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,. 4 ки пОлное поглощение аминокислот, а отмеченные примеси удаляются вместе со сточными водами. После сорбирования аминокислот колонку промывают водой до нейтральных сточных вод и аминокислоты элюируют с колонки 3,0 мз 1,5 н раствором аммиака. Из богатой аминокислотами фракции элюата избыточный аммиак удаляют под вакуумом и остаток нейтрализуют соляной кислотой,до рН 4,5 - 5,5. Нейтрализованный .элюат (объемом около 2,0 м, активностью орнитина 97 98 г/л сопутствующих аминокислот в сумме 45 г/л) повторно пропускают через нонообменную колонку с 600 л КУх 8 в ЙН форме, в которой происходит селективное поглощение орнитина, а сопутствующие аминокислоты выходят со сточными водами. После промывки ионита водой орнитин злюируют с колонки 1,5 н раствором аммиака. Из фракции элюата под вакуумом удаляют аммиак и оставшийся раствор нейтрализуют до рН 4,9 - 5,2. Нейтрализованный раствор общим объемом 500 л и активностью орнитина380 г/л выпаривают под вакуумом доОчищенные препараты ,-орнитцна моногидрохлорида получают дополнитель- . ной очисткой полученных кристаллов обессоливанием, обесцвечиванием, кристаллизацией.Использование способа позволяет повысить выход целевого продукта с 703 до 753 и чистоту целевого продукта с 87,5 - 92,53 до 987