Способ получения антительного чумного диагностикума

СОЮЗ СОВЕТСКИХЮИцмпеепеиРЕСПУБЛИК 1085041 С 19) 9/ЗЧ 5; А 61 К 39 ОБРЕТЛЬСУ осударственкий противоБезуглова,воед,тин а Н.Н;, Кана- умной эритро 1 етод произ" ия и определе;- В сб. Иатериции противоей Азии и КаАта, 1 Ч 69,тво СССРЧ/3 Ч 5, 1980,диагностикумтабильным.о достигаемом.пособ получен получаемы достаточно ее близким у является УДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯГКНТ СССР ПИСАНИЕ И(72) А.Н, Наркевич, Е.В А.П. Кочеткова, В.В.,Пер В.А, Козлова и В.Н. Иилю (53) 66.16-07(088,8) (56) Имутер И.й., Басов тов .Р.В. Иеньаов П.И. Ч цитарный диагностикум. ) водственного изготовлен иия годности препарата.алы 7 Т научной конйерен чумных учреждений Средн захстана, вып. 1, Алмас. 135-136,Авторское свидетельс 8 1021038, кл. А 61 К 3 Изобретение относится к микробиоло" гии, в частности к серологицескии ие" тодам лабораторной диагностики чумыИзвестен способ полуцения антитель- ного чумного диагностикума путеи пред" варительной обработки носителя с пос" ледующей .сенсибилизацией имунным гамиа-глобулином и .отмыванием целевого продуктаОднако й явд ляется не сНаибол и У результат с ия 2. (Ф (57) СПОСОБ. ПОЛУЧЕНИЯ АнтитЕЛЬНОГО ЧУМНОГО ДИАГНОСТИКУИА путем.предварительной обработки частиц карбоксильного катионита с последующей,сенсибилизацией иммунным гамма"глобулимои и отмыванием целевого продукта, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью уп" рощенйя способа, предварительную:об- . работку частиц карбоксильного катионита осуществляют красителем нейтральным красным. в соотношении 100: 1, за" тем раствором бисульфитногь аддукта полиакролеина при рН 7-8,антительного цуиного диагностикума, которйй заключается в том, что частицы карбоксильного катионита обрабатывают раствором.альбумина в течение 18 ч в соотношении 4: 1, затем связав" шийся с катионитом белок денатурируют нагреваниеи взвеси в водном спиртеопри 75 С, покрытые белком частицы полимера отмывают буйерныи раствором и обрабатывают последовательно раство рами глутарового диальдегида, после чего сенсибилизируют иимунным гамиаглобулином. Взвесь целевого продук-"31 О 85041 4та в физиологическом растворе исполь= рительной.обработки частиц карбоксильзуют в серологических реакциях, . ного катионита с последующей сенсиУказанный способ имеет ряд недос- билизацией иммунным .гамма"глобулиномтатков, активность диагностикума зави- и отмыванием целевого продукта предва 5сит от качества препарата.альбумина, рительную обработку частиц карбоксильобработка катионита альбуминои длит- ного катионита осуществляют красителемся 18 ч и включает стадию нагревания нейтральным красныи в соотношениив водном спирте.. 100. 1, затем раствором бисульфитногоЦелью изобретения является упроще" 10 аддукта полиакролеина при РН 7-8.ние способа получения антительного Используемый бисупьфитный аддуктчумного диагностикума. полиакролеиНа образуется при раствореПоставленная цель достигается теи, нии попиакролеина в 10,-ном водномчто в способе получения антительногорастворе двуокиси серы. Реакцию можночумного диагностикума путем предва представить следующим. образомв -сн-сн-с(о)н -- сн,-сн-сн(он)-зон,Оиагностический препарат имеет та мешивании прибавляют к суспензии 2 млкуюже чувствительность и специфиц,0 Я-ного раствора нейтрального красность, что и препарат, полученный по ного .(3-амино-дииетиламино-метилизвестному способу. Это было установ- Феназин гидрохлорид), перемешиваютлено в одномоментной проверке препон- ; 15. минцентриФугируют и отмывают осаратов в равных условиях на одних и. 2 док 3 раза 5 ил дистиллированной воды.тех же бактериальных взвесях. Оба пре . Полученный ярко-красный осадок отмыпарата обладали специФичностью и не вают 3 раза 10 мл 0,2 И Фосфатногодавали перекрестных реакций при про"буфера (РН 7), суспендируют в 1 млверке с гетерологичными штаммами (си. этого буфера, к смеси добавляют притаблицу). перемешивании 1 мл Р-ного раствораОднако предлагаемый способ получе" бисульфитного аддукта полиакролеина,30ния препарата более прост, процесс перемешивают 0,5 ч, центрифугируют иприготовления препарата содержит ме", , отмывают 10 мл 0,2 .Н Фосфатного буфенее трудоемкие операции (исключает . ; Ра с РН 7. Осадок суспендируют в 2 млобработку альбумином и процесс его де- этого же буфера и добавляют к взвесинатурирования на носителе), продолжи". 35 5."10 кг чумного иммуноглобулина втельность его приготовления на 18 ч0,2-0,1 мл физиологического раствора.меньше. Суспензию перемешивают при коинатнойКроме того, дополнительным преиму" теипературе 0,5 ч, выдерживают 18 чщестеом получаемого продукта является при 4 С,затеи отмывают трижды 10 млто, что он окрашен и образует конт Физиологического Раствора центрифуги"растную картину в серологических реак- рованиеи. Осадок суспендируют е 5 млциях в отличие от препарата, получен", Физиологическогораствора и эту взвесьного по прототипу, Таким образом, по-используют для серологических реакций.вышается демонстративность иммунологи4%ческой реакции, что,облегчает учет и ф , П р и м е р 2. Методика приготов"регистрацию ее результатов при исполь" ленив препарата, как в примере 1, нозовании данного диагностикума. используют 0,2 Й фосфатный буферП р и м е р 1, Частицы катионита- (рН 7,5), а окрашенный носитель обКРКП размером 2-5 мкм в количестверабатывают 7,Р-ным раствором сернис".100 мг суспендируют в 10 мл 0,1 М Раст того адпукта полиакролеина в течениеора едкого натра в течение 2 ч, затеи; 40 мин,ц нтриФугируют, осадок отмывают центмРИФугировэнием 10 мл дистиллированноилений препарата как в примере 1 ноиспользуют 0 2 й фоафатный буфер (РН 3)ваннои водо до неитрально окрашенныи носитель обрабаты ают .супернатанта, Осадок суспендируют в 10 ф-ныи раствором сернистого аддукта2 мл дистиллированной воды и при пере- полиакролеина в течение 1 ч,5 Ю 85041 6Методика постановки реакции. на дне лунки в вире компактного осадВ лунках .полистироловых пластин . ка или колечка ярко-красного цвета. готовят последовательные двухкратные Лиагностикум позволяет выявлять с, разведения исследуемого материала на высокой чувствительностью как типицФивиологическом растворе. Контроль ные штаммы возбудителя цумы; выращен 5ные: лунки не содержат антигена В. ные. при 28 и 37 С, так и. дефектныео каждую лунку добавляют по 1,капле . по одному.и более антигенам. Риагнос" сенсибилизированной полимерной суспен- тикум специФичен, перекрестных реакзии., пластинку тщательно встряхивают 10 ций с гетерологичными щтаммами (воз оставляют. на 1,5-2.ч, после чего .:про- буритель псевдотуберкулеза и кишечно"изводят учет реакции:. При положитель:" . тифозное семейство бактерий) не Лает ной реакции образуются агглютинаты результаты исследования препаратов равномерно выстилающие дно лунки. : . . получаемых описываемым:и известным . При. отрицательной реакции иммуносор-15 способами приведены в таблице. бент, как.и.в контроле, собирается(микробные клетки/мл)атветее вееее ттввтетеаеееевееветаввееЕВШтаммы возбудителя чумы Препарат, полученнйй по Температура выращивания атам мов, С .о: тватаев юеетюеваееюспособувпроетотипу . предлагаем му способу те е ею е в2,510 2 ь 510 5 .10 510,Реп ентал Корректо вавататееЕтатвееааааааатееаеее каз 2810ЯЬЙИЙФосудар Подпи и отк аб., д е Тир енного комите 13035, МоскваГКНТ СССР по иэобретени -35, Раущская ытиям 4/5