Способ консервирования дрожжей вида и

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН дц А 01 Н 1/02,Я 104 ЕЛЬСТ ВИД во ССС70.гагосЬ огарке 1 апй егчагз - гцгея, - Ьо 1 229 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗО(1) Институт проблем криобии криомедицины АН УССР(56) 1. Авторское свидетельсФ 457727, кл. С 12 М 1/04, 12. НцЬа 1 е 1 с 1 КосЬочачх 1 оча А., 1,1 оцЫ п 1 годеп яоГ еаза сц 1 гцгея. 1 Бцгч 1 ча11 егагцге геч 1 еч оГ гпе ргеоп оЙ Йцп 81 аг ц 1 гга 1 оы гешрегаАпгоп 1 е чап 1.ееепйосЕ Л.М 1 сгапй Яечо 1., 1978, 44,У 2, р241 (прототип).(54)(57) СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ДРОЖЖЕЙ ВИДА ЯАССНАКОМУСЕЯ СЕКЧ 1- Я 1 АЕ и ЯАССНАКОИ.СЕЯ ТЕ 1.ЬПК 1 Я УпутеМ криогенного замораживания в защитной среде содержащей дрожжевой экстракт, пептон и воду, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью пбвьппения жизнеспособности клеток, замораживание проводят в два этапа, на первом из которых - в интервале температур от 15-20 до (-15)-(-20) С со скоростью 0,02- 0,2 С в 1 мин, на втором этапе - до температуры криогенной жидкости со скоростью 2-3 С в 1 мин, а защитнаяосреда дополнительно содержит глюкоз1082363Способ Осуществляют следующим об -разом.Клеточную суспензию с концентрацией клеток 10 млВ ростовой среде8в об ьеме 1, 5 мл Вносят в полиэтиле -5новые ампулы после чего ампулы заВ паивают и замораживают по двухзтапной программе со скоростью 0,02 о,0,2 С в минуту: на первом этапе винтервале температур ст 15-20 до( - 15) в (-20) С и на втором этапе со, скоростью 2-3 С в минуту в интервалеотемператур от (-15)-(-20) цо -196 С,Отогревают образец на водяной банеоФпри 28-30 С,15П р и и е р,1, Образцы клетокБасс 11 агошусея сев 1 я 1 ае раса 13 вобъеме 1,5 мл в среде (10 г пептона,5 г дрожжевого экстракта, 20 г глюкОзы ВОды 1 л) с исходной концент20 .-, 3рацией клеток (1,68+0, 1367) х 10 клеток/глл охлаждают от 20 до - 15 С соо,скоростью 0,02 С в минуту, и на втоором этапе охлаждают от - 15 до -196 Со25со скоростью 3 С в минуту. После хра,нения в жидком азоте В течение одного года образць отогревают на водяной бане при 28 С. Оценку качестваклеток Бас.с 1 лагошусея сег"я:чае раса 13 проводят по количеству жизне 30способных клеток в образцах определяемом чашечным методом, Количество жизнеспособных клеток Бассйагошусея сегч- яае раса 13 после хранения в течение одного го 6 ца составляет (1,6720++ 0,1349)х 10 клеток/мл,т.е. 99,57е жизнеспособных клеток.П р и м е р 2. Образцы клетокБассЬагошусея Се 11 цг 1 я ув объеме1,5 мл в среде, состоящей из 10 г пептона,5 г дрожжевого экстракта, 20 г глюкозы,воды 1 л, с исходной кбнцентрациейклеток (0,6925+0,0213) 10 клеток/млохлаждают со скоростью 0,02 С в минуту в интервале температур от 20одо -15 С и на втором этапе со скоростью 3 С В минуту в интервале температур от -15 до -196 С. 1Изобретение относится к микробиологии, в частности к криоконсервированию дрожжей, которые находятширокое применение в хлебно-пекарноми пивном производстве.Известен способ низкотемпературного консервирования микроорганизмас помощью защитной среды, содержащеи10-507 глицерина, 5-2 ОЕ сахарозы и107 буФера Е 11.Однако данный способ не обеспечивает высокой жизнеспособностиклеток БассЬагошусея сегчхяае иБассЬагогпусея ге 11 цгдятак как приналичии в защитной среде лимоннокислого натрия и при неконтролируемой скорости охлаждения жизнеспособность клеток Бассйагошусея сегчя 1.ае и Басс 11 агошусея Се 11 цг 1 я снижается,Известен способ консервированиядрожжей путем криогенного. замораживания в защитной среде, содержащей кукурузный экстракт, дрожжевойэкстракт, пептон, телячью сывороткудиметилсульФоксид и воду.Замораживание в жидком азоте ведут по одноэтапной программе со средней скоростью охлаждения 350 С в минуту 121.Недостатком известного способаконсервирования дрожжей является точто одноэтапное охлаждение в жидкомазоте со скоростью -350 С в минутуобеспечивает более низкую вькивае -масть дрожжевых клеток, а в составсреды консервирования помимо пеутона и дрожжевого экстракта входят ещкукурузный экстракт, телячья сыворотка и диметилсульФоксид, которь еявляются малодоступными и дорогими.Цель изобретения повышение жизнеспособности криоконсервированныхклеток Басспагошусея сегчъяае иБасс 11 агошусея се 1 1 цгя У.Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу консервирования дрожжей Басс 11 агошусея сегчяхае и БассЬагошусея се 11 цг 1 я У путем криогенного замораживаниь взащитной среде, содержащей экстракт,пелтон и воду, замораживание проводят в 5 бдва этапа, на первом из которых - в интервале температур от 15-20 до(-15)-(-20) С со скоростью 0,020,2 С в минуту, на втором этапе -до температуры криогенной жидкости 55со скоростью 2-3 С в минуту, а защит-ная среда дополнительно содержитглюкозу. После хранения в жидком азоте в течение одного года образцы отогревают на водяной бане при 28 С,Оценку качества клеток Басс 11 агошусея с.е 11 пгя Упроводят по количеству жизнеспособных клеток в образцах, определяемом чашечным методом, 1(оличество жизнеспособных клеток БассЬагошусея ге 11 пг 1.я Упослс1082363 Предлагаемый также состав средыконсервирования (пелтон, дрожжевой экстракт, глюкоза и вода), который является одним из вариантов ростовойОхлаждение по такой программе среды для дрожжей, позволяет избежать приводит к повышению количества жиз- процесса отмывания клеток на подготонеспособных клеток в среднем на 407. вительном этапе процесса криоконсерСравнительные данные приведены в вирования, что обеспечивает более натаблице. дежный режим стерильности.Сравнительные данные о выживаемости дрожжевых клеток, консервированныхпо известному и предлагаемому способам . хранения в течение одного года составляет (0,6900 + 6,0209) 10 клеток/мл, т,е. 99,87. Состав среды, г Программы охлаждения Количество жизнеспособных клеток в 1 млх 10 8Предлагаемый способ Пелтон 10 Исходная концентрация клеток Дрожжевой экстракт 51Глюкоза 20Вода до 1 л 100 2,410,1995 4,2210,2313 100 Известный способ Исходнаяконцентрацияклеток 100 2,64+0,265 100 3, 86+0,2256 Одноэтапноезамораживаниесо скоростьюн 350 С/минот +20 до( Техред С.Мигунова Редактор П. Макаревич Тираж 722 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113025, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Заказ 1594/1 Филиал ППП "Патент", г. ужгород, ул. Проектная, 4 Пелтон 5Дрожжевой экстракт 2,5 Кукурузный экстракт 25 Телячья сыворотка 150 мл Диметилсульфоксид 100 мл Вода до 1 л Двухэтапноезамораживание0,2 оС/мин от