Способ получения бактериальных амилаз

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХР"СПУБЛИК 28 // С 12 И 1/20 11 С 12 ОПИСАН К АВТОРСКОМ ИЗОБРЕТЕНИЯ видетельство ССС2 И 1/20, 1982 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ 21) 3526189/28-13(72) Н.М. Павловец, В.И. СухаревиВ.И. Яковлев, О.Е, Анченко,А.И. Аленис, Д.В. Канайененеи М.И. Богданова71) Ленинградский ордена Октябрькой Революции и ордена ТрудовогоКрасного Знамени технологическийинститут им. Ленсовета(54) 57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ АМИЛАЗ путем глубинногокультивирования бактерий Вас 111 ызиЬ 1111 з ЯКв жидкой питательной среде, содержащей кроме источника углерода, азота, необходимыхфакторов роста, минеральных солейи воды неорганический восстановитель в количестве 0,001-0,05,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с .целью увеличения концентрациифермента в среде, в ферментационную среду после 34-44 ч культивирования вносят неорганические окислители - ферронианид калия илиперманганат калия в количестве0,0005-0,001 мас.Ъ,1074902 Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к технологии получения бактериального ферментного препарата амилосубтилина.Известны микробиологические способы получения амилолитических ферментов, которые осуществляются путем глубинного культивирования продуцентов на различных питательных средах, содержащих источники углерода, азота, Фосфора, магния, натрия,кальция, микроэлементы и источники необходимых рОстовых факторов 11,Наиболее близким по технической сущности является способ получения бактериальных амилаз, предусматривающий глубинное культивирование бактерий Вас 111 цз зцЬй 111 з БКв жидкой питательной среде, содержащей кроме источников углероца, азота, необходимых факторов роста, минеральных солей и воды неорганический восстановитель в количестве О, 001-0, 05 Г 2 2.Х недостаткам этого способа относится малый выход фермента при высокой концентрации крахмала в среде.Целью изобретения является увеличение концентрации фермента в среде.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения бактериальных амилаз путем глубинного культивирования бактерий Вас 111 цз зцЬй 111 з БКв жидкой питательной среде, содержащей кроме источников углерода азота, необходимых Факторов роста, минеральных солей и воды неорганический восстановитель в количестве 0,001-0,05, в Ферментационную среду после 34-44 ч культивирования вносят неорганические окислители - ферроцианид калия или перманганат калия в количестве 0,0005-0,001 масСпособ осуществляют следующим образом.В качестве продуцента с -амилаз используют промышленный продуцент Вас 111 цз зцЬ 111 хз БК. КультивиВыход фермента,к контролю Без до- С добавлением окислителябавокчерез 34 ч через 44 чФерментации ферментации Условия Ферментации 100 160 151 КонтрольОпыт: О, 005 К 4 Ее (СИ)Ь +( рование продуцента проводят в условиях аэрации на производственнойпитательной среде, с добавлениемвосстановителя в начале фермента 5ции. Через 34-44 ч культивированияв ферментационную среду дополнительно вносят окислитель, напримерКЕе(СХ) в количестве 0,001 мас.Ъ,Выращивание проводят в колбах накачалке при 32 С в течение 56 ч,Добавление окислителей повышаетокислительно-восстановительный потенциал на 23-28 мВ.П р и м е р 1. Односуточнуюкультуру Вас 111 цз зцЬ 111 з БК,15 выращенную на картофельных столбиках, пересевают жидкую ферментационную среду указанного состава,внося с посевным материалом 0,005 Ъвосстановителя К 4 Ве(СИ)б понижаю 20 щего ЕЬ среды на 20 мВ, и через34 ч ,ерментации в Ферментационнуюсреду вносят дополнительно 0,001 Ъокислителя Езде (СЦб повышающего Рй среды на 23 мВ,25 Через 56 ч выход амилаз в условиях регулируемого ЯЬ среды, т.е.сначала понижаемого восстановителем,а через 34 ч повышаемого окислителем, превышает выход амилаз в контрольных условиях, т.е. без регулирования 8"и на 48 Ъ (710 и 480 едмлсоответственно).П р и м е р 2. При выращиванииВас 111 цз зцЬТ 111 з БКв условиях35 примера 1, но отличающихся тем, что0,001 окислителя К Ге(СМ)6 добав 3ляют через 44 ч ферментаций. Через56 ч выход амилаз в условиях опытаувеличивается на 60 Ъ по сравнениюс выходом Фермента в контроле (76840 и 480 ед/мл соответственно).П р и м е р 3, При выращиванииВас 111 цз зцЬ 1111 з БКв условияхпримера 1, но отличающихся тем, что0,0005 окислителя ЕМп 04 добавляют45 через 40 ч ферментации, Через 56 чвыход амилаз в условиях опыта увеличивается на 51 по сравнению с выходом Фермента в контроле (725 и480 ед/мл соответственно).1074902 Составитель ф. КононковРедактор Н. Рогулич Техред Л.Мартяшова КорректорИ. Эрдейи Заказ 458/24 Тираж 522 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патентф, г. Ужгород, ул. Проектная,4 Согласно предлагаемому способу увеличивается выход амилаэ на 48- 60, который достигается добавлением неорганических окислителей (КЕе(СХ), КМп . Благодаря этом в ферментационной среде повышаетсяЕЬ среды на 23-28 мВ, что позволяетпродуцентам лучше испольэовать субстрат (крахмал),