Штамм тэпв-4 для идентификации энтеропатогенных наг вибрионов 4-го фаготипа

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКРЕСПУБЛИК зи В 65 В 51/1 1 ТЕНИ(57) Штамм Рйадцгп сйо 1 ег 1 сцгпФ 111 (Коллекция бактериофаговго научно-исследовательского инстцин и сывороток МЗ СССР), испдля идентификации энтеропатогенвибрионов 4-го фаготипа. Лебедев, довников, Тепляков ТЭПВ, Тбилисскоитута вакользуемый ных НАГго Красский проСР по заХ 7/00,тоти ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Всесоюзный ордена Трудовоного Знамени научно-исследовательтивочумный институт Микроб35 40 Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к диагностическим фагам, применяемым для ускоренной идентификации возбудителей острых кишечных заболеваний, не агглюминирующихся. холерной 0 - 1 сывороткой энтеропатогенных НАГ-вибрионов методом фаготипирования.Известен штамм РЬадцв Чад 907/2062, обладающий активностью в отношении Над-вибрионов 05 серовара, не относящихся к 01 группе 11.Известен также штамм РЬадцв сЬоепсцвУП серотипа специфически активный к штаммам НАГ-вибрионов 0-56 серовара 2.Однако известные штаммы специфичны только в отношении штаммов 05 и 56 серо- вара и не действуют на остальные серовары НАГ-вибрионов.Целью изобретения является создание штамма фага для идентификации НАГ-вибрионов 4-го фаготипа,Цель достигается с помощью штамма РЬодцв сйо 1 епсцв ТЭПВ.Штамм РЬадцв стоепсцв ТЭПВвыделен путем селекции из популяции холерного эльтор-фага 1 Х серотипа. Депонирован и хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского научно-исследовательского института вакцин и сывороток МЗ СССР под номером Ф. Он используется для идентификации энтеропатогенных, не относящихся к 0-1 группе НАГ-вибрионов 4-го фаго типа методом фаготипирования.Штамм характеризуется следующими свойствами.Морфологические признаки.Фаг ТЭПВотносится к 111 гомологическому ряду. Частицы фага состоят из головки гексагональной формы размером 650 х 605 А и короткого отростка 135 А. Штамм РЬадцв сйо 1 ег 1 сцгп ТЭПВотносится к 1 Х серологическому типу холерных фагов,Специфичность. Штамм РЬодцв сЬоепЧцв ТЭПВспецифически активен к штаммам энтеропатогенных не относящихся к 0 - 1 группе НАГ-вибрионам 4-го фаготипа, выделяемых от больных ОКЗ, из сточных вод и реже из открытых водоемов различных регионов, в большинстве которых они занимают второе место после шта ммов НАГвибрионов 1-го фаготипа. Он абсолютно инактивен к штаммам Ъ. рагайасво 1 у 11 сцз. Ч. аР 1 поу(1 сцз и к штаммам других видов вибрионов и близкородствен ным им микроорганизмам: Аеговопаз, Сопавопаз, Рзецдовопаг, Вас 1 егасеае (Ьсйде 1 а, 5 авопеа, ЕзсЬег 1 сйа и др.).Физиологические признаки. Фаг ТЭГ 1 Вактивен, главным образом, в отношении вирулентных штаммов вибрионов эльтор и НАГ-вибрионов 14, 34, 41 и 43 сероваров,5 О 15 20 25 ч 0 находящихся в шероховатой форме, что и определяет умеренную степень вирулентности последних.Оптимальная множественность инфицирования микробной клетки 0,1 - 0,2 при плотности посевов 1.10 - 2.10 м.к./мл. Полтный лизис в жидкой среде при указанном соотношении наступает через 3 - 5 ч инкубации при 37 С.Физические свойства. В жидком виде. при 4 - 10 С хранится 2 г, что делает его удобным для транспортировки,Для получения штамма РЬодцв сЬо 1 епсцв ТЭПВприменяют специально подобранные эталонные штаммы ИЬпо Над 442 или ИЬпо еаког 75 М.Размножение фага ТЭПВ. Культуру штамма-продуцента 71 Ьпо Над 442 или Ч 1 Ьпо е 11 ог 75 М отсевают на пластинку агара Мартена: рН 7,2 - 7,6 из 3 - 4-часовой бульонной культуры. Через 18 - 20 ч инкубации при 37 С готовят 1 - 2 млрд. взвесь агаровой культуры в бульоне и 0,5 - 1,0 мл ее вносят во флакон со00 - 150 мл того же подогретого в термостате при 37 С бульона. Посев подращивают 2 - 3 ч при 37 С до концентрации 5.10 м.к./мл. Исходя из оптимальной множественности инфекции (1:1 или 1:2), добавляют сюда маточный фаг в бульон с культурой. Смесь фага с культурой быстро переносят в бутыль (с помощью вакуума), содержащую 1 - 1,5 л также подогретого при 37 С бульона Мартена, с рН 7,2 - 7,6. Все содержимое бутыли инкубируют в термостате при 37 С и периодически помешивают. За посевом ведут наблюдение. Нарастание мутности бульона свидетельствует о продолжающемся росте и размножении культуры микробного штамма. Через 3 - 5 ч наступает просветление бульона с посевом на 3+ или 4+; это указывает на необходи.мость прекращения инкубации. Содержимое фильтруют через стерильные фарфоровые свечи Л - .3 или Ллибо через асбестовые пластины СФ. Отфильтрованный препарат проверяют на стерильность, активность и специфичность диапазона литического действия по методикам согласно Приказу МЗ СССР192 от 19.02.79 г и разливают в ампулы по 2 мл. Препарат жидкий, хранят при 4 - 10 С. Штамм РЬарцв снаепсцв ТЭПВприменяют для диагностики и идентификации 4-го фаготипа энтеропатогенных НАГ-вибрионов при их фаготипировании в разведениях 10- 10 . Расплавленный и остуженный до 45 - 50 С 1,5 - 20/о агар на любой основе (Мартена, Хоттингера, МП) рН 7,4 - 7,6 разливают в стерильные чашки Петри по1125160 Составитель П. Красильников Техред И. Верес Корректор И. Эрдейи Тираж 693 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и от крытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4Редактор Н. Пушненкова Заказ 8411/14 20 - 25 мл и после застывания подсушивают 30 мин при 37 с. В пробирки с 3 мл 0,7 о/о агара, рН 7,2 - 7,6 расплавленного на водяной бане и остуженного до 45 С, добавляют 0,2 - 0,3 мл 3 - 4 часовой бульонной культуры испытуемого штамма НАГ-вибриона, тщательно смешивают и быстро выливают на агаровую пластинку в чашку Петри, После его застывания на газон культуры платиновой петлей 2 мм или репликатором наносят указанный фаг из всех разведений. После подсыхания капель чашку закрывают крышкой, переворачивают вверх дном и инкубируют при 37 С. В случае необходимости получения ускоренного ответа результат учитывают через 3 - 4 ч, а при плановом обследовании допускается и позже, в пределах 18 - 20 ч. Оценку литического действия фага ведут по 4-балльной системе: 4+ - сливной полный лизис; 3+ - множественные негативные колонии фага или полный лизис со следами вторичного роста культуры вибриона; 2+ - изолированные негативные колонии фага (не менее 10) или пятно лизиса со значительным ростом вторичной культуры вибриона. Положительным считают лизис культуры от капли фага любого разведения не ниже 2+.Использование изобретения позволяет дополнить комплект нового препарата фагов ТЭПВ для ускоренной диагностики возбудителей ОКЗ у людей методом фаготипирования энтеропатогенных НАГ-вибрионов в качестве компонента, идентифицирующего штаммы только 4-го фаготипа.