Способ исследования протеолиза

СОЮЗ СОВЕТСН 4 ХЕЦЮЛФП ЕПЯ 9РЕСПУБЛИН ЙВ ИИ МЮ А 61 В 10 00 ГОСУДАРСТВЕННЬЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЬФОПИСАНИЕ ИЭОК АВТОРСКОЬФУ С БРЕТЕНИЯВЩФТВЫТВУ ЛИ 01 р;,8-13 Бюл. В 4 ский государственныйститут.8. 8)И. апд ИагаМу А. ТЬеРереп и 1 ФЬ НеЮ 91 опуьо 1 ф, 1932, Х 16 В,А. Определениактивности в жерстной кишкеоф, 1975, Р 3,пролудке, Ла 131(21) 3292383/(4) (57) СПОСОБ ИССПЕДОВАНИЯ ПРОТЮЛИЗА, включающий введение белка через зонд в желудок с последующим .извлечением содер,кимого желудка и определением степени расщепления белка, отличающийся тем, что, с целью контроля за динамикой расщепления белка непосредственно в желудке, в антральный отдел желудка вводят допблнительно зонд, белок с заданной концентрацией и величиной рН вводят в этот зонр далее непрерывно перекачивают содержимое из антрального отдела желудка в кардиальный через промежуточную наружную емкость, периодически определяют концентрацию белка и величину рН содержимого емкости.Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к методам исследования желудочной секреции.Известен способ определения протеолитической активности извлеченного иэ желудка сока в искусственных условиях путем термостатирования смеси разведенного в 100 раз желудочного сока и раствора беЛка известной концентрации и пН при 37 С. Точность такого способа высока и 10 составляет +2 (.13.Недостаток указанногб способа заключается в том, что исследуется протеолитическая активность извлеченной порции желудочного сока, что 15 не может характеризовать истинную суммарную активность всего желудочного секрета. Искусственные условия, созданные для прохождения протеолити ческой реакции, не соответствуют условиям естественного пищеварения.Известен также способ определения протеолитической активности желудочного сока непосредственно в желудке Г 23.Однако данный способ не позволяет определять динамику изменения протеолитической активности в течение исследования, а лишь только суммарный результат в конце исследования. 30Цель изобретения - контроль за динамикой расщепления белка непо,средственно в желудке.Указанная цель достигается тем, что согласно способу исследования протеолиэа включающему введение белка через зонд в желудок с последующим извлечением содержимого желудка и определением степени расщепления белка в антральный отдел же лудка вводят дополнительно зонд, белок с заданной концентрацией и величиной рН вводят в этот зонд, далее непрерывно перекачивают содержимое из антрального отдела желудка 45 в кардиальный через промежуточную наружную емкость, периодически определяют концентрацию белка и величину рН содержимого емкости.Способ осуществляют следующим образом.Натощак больному вводят в желудок два желудочных зонда диаметром 4 5 мм с металлическими метками на конце, Зонды под рентгеновским контролем устанавливают так, чтобы отверстие одного открывалось высоко в кардиальном , второго в антральном отделах желудка. Из желудка откачивают по длинному зонду все содержимое желудка и затем вводят по ко роткому зонду 200 мл 2-ного раствора овоальбумина с рН 5,0 иподкрашенный 1 мл 0,5-ного раствора фенолрот. К обоим каналам зонда подключают перистальтический насос 65 и непрерывно перекачивают содержимое из длинного канала в короткий через промежуточную наружную емкость в которой производят непрерывное измерение рН стеклянными электродами, подключенными к рН-метру. Показания рН -метра записывают самописцем КСП, подключенным к соответствующим гнездам рН -метра. Периодически, раз 5 в мин. иэ наружной емкости отсасывают 4 мл. На фотоэ)ектроколориметре при длине волны 590 нм опре - деляют концентрацию фенолрота. Затем к 2 мл этой порции приливают 2 мл реактива фолина в разведении 1:10 и 1 мл 1,2-ного,йаОН в соответствии с принципоМ метода АнсонаМирского. К вторым 2 мл порции добавляют 2 мл 10-ной трихлоруксусной кислоты, тщательно перемешивают и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 15 мин. Из надосадочной жидкости отсасывают 2 мл и также добавляют к ней 2 мл реактива фолина в разведении 1:10 и 1 мл 1,2-ногойаОН. Через 15 мин после приливания упомянутых реактивов определяют интенсивность окраски растворов на спектрофотометре при длине волны 560 нм, По разности концентрации в пробах с осаждением и без осаждения белка определяют процент его расщепления, Результаты выражают в процентах. По изменению концентрации фенолрот в пробах определяют приблизительно объем секретируемого сока. Определив таким обра-, зом динамику расщепления белка в течение 1 ч (12 проб), отсасывают полностью все содержимое из желудка и определяют суммарный объем секрета, концентрацию белка, процент его расщепления и рН по описанным способам. Сразу же после отсасывания желудочного содержимого вводят по короткому зонду 200 мл 2-ного раствора овоальбумина с рН 5,0 и 1 мл 0,5-ного фенолрота. Вводят необходимый стимулятор секреции , ( гистамин, инсулин, и т. д. ) и полностью повторяют описанный процесс, В зависимости от потребностей исследования проводят также и третий цикл с другим стимулятором секреции. На основании полученных данных строят графики динамики расщепления белка в различные стадии исследования, .а также дебита кислоты,П р и м е р. Больному В проведено исследование внутрижелудочного протеолиза. Натощак в желудок вводят двухпросветный зонд и аспирируют секрет из желудка (60 мл рН 1,95), По короткому каналу зонда вводят в кардиальный отдел желудка 200 мл 2-ного раствора овоальбумина с рН 5,0 и покрашенный 1 ют 0,5-ного фенолрот. Периодически для лучшего1069779 Стимулятор, мин 5 10 0,6 0,8 НатощакАнтропинГи стами н 0,9 1,0 10 2,5 6,0 8,1 Составитель Н. ВалееваРедактор А. Мотыль ТехрвдМ,Надь Корректор А. Зимокосов Заказ 11598/7 Тираж 688 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 перемещивания раствора часть секрета отсасывают по длинному каналузонда и тут же вводят по короткомч..Раэ в 5 мин аспирируют 5 мл содержимого, в которых определяют рН,концентрацию фенолрот (спектрофотометрически концентрацию белка и концентрацию нерасщепленного белка методом Ансона-Мирского. К 1 мл секрета приливают 1 мя 1,20-ного йаОНи 1 .мл реактива Фолина (1: 101 . Си-нюю окраску раствора оценивают наспектрофотометре. При определенииконцентрации нерасщепленного белка Суммарный объем секрета составил 360 мл. Потери через привратник 20 мл. Результирующий рН 1,5.На основании полученных данных строят график внутрижелудочного протеолиза и кислотопродукции. предварительно к 1 мл секрета приливают 1 мл 10-ной трнхлоруксуснойкислоты,центригируют при 1500 об/мин15 мин и иэ надосадочной-жидкостиотсасывают 1 мп раствора для реакцииАнсона-Мирского. По окончании исследования отсасывают все содержимоеи определяют суммарный объем, рН.По концентрации фенолрот устанавливают потери раствора через приврат" 10 ник. Результаты исследования протеолизаэа 5 мин, Ъ:1 15 20 25 30. 35 . 40 0,7 . 1,0 2,0 0,8 1,1 1,4 1,0 0,4 0,3 0,3 0,2 0,4 7,0 7,48,1 8,0Предлагаемый способ позволяетопределять динамику протеолиза внутри желудка при белковой и других видах стимуляции с высокой точностью и одновременно дебит кис- лотИ.