Способ получения высокополимерной рнк из дрожжей

(5 С 01 Ы 33/48 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Ь К.В.дзигу,ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЫСОКОПОЛИМЕРНОЙ РНК ИЗ ДРОЖЖЕЙ,(57) Способ получения высокополимерной РНК из дрожжей путем суспендиро.вания нх в растворе литнческого агента с последующим нагреванием суспензии и выдерживания ее в нагретомсостоянии, охлаждения, центрифугирования и осаждения полученной суммарной РНК этанолом из надосадочнойжидкости, растворения суммарного РНКв воде и осветлеиия раствора, осаждения высокополимерной РНК из полученного раствора хлористым натрием,центрифугирования и растворения в воде полученного осадка высокополимерной РНК, осветления раствора ивыделения конечного продукта, о т -л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью ускорения процесса полученияцелевого продукта и его удешевления,дрожжи суспендируют в водном 0,31,2 М растворе 2-этилгексановой кислоты, содержащем 0,1-0,5 М НаС 1(рН - 7,0-7,5), суспензию выдерживают при г 92-98 С в течение 10-40 мино3охлаждают до 20-30 С, центрифугируютпри 0-4 С., кнадосадочной жидкостидобавляют этанол до содержания 5055 об.7, центрифугируют при 0-4 ОС,полученный осадок суммарной РНК растворяют в воде до содержания 150 -200 об.ед. после центрифугирования.образовавшегося раствора при 0-4 Ск надосадочной жидкости добавляютЮаС 1, выдерживают смесь при 0-4 Св течение 1-2 ч и отделяют путемцентрифугироваиия осадок высокополимерной .РНК, который растворяют до150-200 об.ед. 260 мм, после цент-,рифугировання полученного растворак надосадочной жидкости добавляютНаС 1 до содержания 0,1-0,5 М и этанол до содержания 50-55 об.й и отделяют целевой продукт,936701 ВНИИПИ Заказ 2787/2 Тираж 897 Подписное филиал ППП "Патент", г,ужгород, ул.Проектная, 4 Изобретение относится к областиорганической химии, более точно кхимии физиологически активных соединений.Известен способ получения высокополимерной РНК из дрожжей путем суспендирования их в растворе литического агента с последующим нагреваниемсуспензии и выдерживания ее в нагретом состоянии,. охлаждения, центрифугирования и осаждения полученной суммарной РНК этанолом из надосадочнойжидкости, растворения суммарной РНКв воде и осветление раствора, осаждения высокополимерной РНК из полученного раствора хлористым натрием,центрифугирования и растворения вводе .полученного осадка высокополи-.мерной РНК, осветления раствора ивыпеления конечного продукта и . 20Однако известньм способ являетсятрудоемким и требует использованиядорогого дефицитного реагента додецилсульфата.Целью изобретения является уско" 75рение процесса получения целевогопродукта и его удешевление,Цель достигается. тем, что дрожжисуспендируют в .водном 0,3-1,2 М растворе 2 -этилгексановой кислоты, содер)жащем 0,1"0,5 М БаС 1 (рН 7,0-7,5),суспензию выдерживают цри 92-98 Со10-40 мин, охлаждают до 20"30 С,центрифугируют при 0-4 С, к надосаодочной.жидкости добавляют этанол досодержания 50-55 об. , центрифугируют при 0-4 С, полученный осадок:суммарной РНК растворяют в воде досодержания 150-200 об.ед.упослецейтрифугирования образовавшегосяораствора при 0"4 С к надосадочнойжидкости добавляют ЛаС 1, выдержиовают смесь при 0-4 С в течение 1-2 чи отделяют пузем центрифугированияосадок высокополимерной РНК, которыйрастворяют до 150-200 об-,ед. 260 мл,после центрифугирования полученногораствора к надосадочной жидкости добавляют ЫаС 1 до содержания 0,1-0,5 Ми этанол до содержания 50-55 об-,и отделяют целевой продукт,Пример осуществления способа.100 г. дрожжей (ЯассЬагааусез сегечь. -в 1 ае, раса 14, содержание РНК - 1 на сырой вес, содержание влаги 75%), суспендируют в 400 мл водного 0,5 М раствора 2-этилгексановой кислоты (рН 7,3), содержащего 0,15 М БаС 1, и подают со скоростью 250 мл/мин в спиральный трубчатый реактор 1, двойная спираль Архимеда), внутренний диаметр трубки 4 мм, термастатируемыйопри температуре 97 С. Время пребывания смеси в реакторе 40 мин. Из реактора смесь подают в охлаждаемый водой холодильник, где смесь охлаждаютодо температуры 20 С. Охлажденную смесь центрифугируют при 4000 об/мино в течение 15 мин при 0-4 С. Из надосадочной жидкости осаждают суммарную РНК, добавляя равный объем этанола (около 400 мл). Выпавший осадок суммарной РНК собирают центрифугированием (4000 об/мин, 15 мин, 0-4 С), отделяют от надосадочной жидкости и растворяют в воде до концентрации 200 об.ед, 260 мл (около 200 мл). Раствор осветляют центрифугированием при 20000 об/мин в течение 20 мин при ОС. Затем к надосадочной жидкости добавляют ИаС 1 до концентрации 2 М, выдерживают при 0-4 С в течениес 1 ч, центрифугируют 4000 об/мин, 15 мин, 0-4 С) и получают осадок высокополимерной РНК. Осадок высоко- полимерной РНК растворяют в воде до концентрации 200 об.ед, 260 мл (около 100 мл) и раствор центрифугируют при 20000 об/мин в течениео20 мин при 0-4 С. Из надосадочной жидкости осаждают натриевую соль РНК, добавляя НаС 1 до 1,5 М и равный объем этанола (около 100 мл). Осадок РНК собирают центрифугированием прио0-4 С, ь:. Надосадочной жидкости добавляют БаС 1 до 0,1-0,5 М и .этанол до содержания 50-55 об. , полученный осадок высокополимерной РНК отделяют и вь 1 сушивают обычными способами,Предложенный способ позволяет упростить получение высокомолекулярной РНК из дрожжей и удешевить его, поскольку .используется 2-этилгексановая кислота, являющаяся отходом производства.