Способ получения ферментного препарата асперазы

Союз СоветскихСоцнапнстнческмхРеспублик ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ВТООКОМЮ :ВИДТЕЛСТВУ(71) Заявитель 4) АТА ЕРМЕНТНОГОАЗЫ ОБ ПОЛУЧЕНИЯИзоб ие относитс к новомуферментногай культуры ый может не и др. учения новогоз поверхностио гугае, кото нение в медиц,способу попрепаратаАзрегд 111 онайти примотраслях. ифическому дейстляются химотрипного ствикуль вклю звестный способ можности комплекс- сырья, тогда как ,получение преепарата асперазы го использовани е возможн разы" и п технолог в принцип парата "Опо единойЦель ивого спос ментного ряющего а еской схеме- разработка ноия нового ферсперазы, расширственных средс зобретени оба получпрепарата сенал Близкими по спецвию на субстраты явсин и террилитин.Известен способ получения фермент 10препарата амилолитического дейя - "Оразы" из поверхностнойтуры Азрегд 111 из огугае, которыйчает экстракцию водой,осаждениеэтанолом при отношении объема 1:2,растворение полученного осадка в водепри отношении веса 1;3 и осаждениецелевого продукта этанолом при отношении 1;(1-3).Первый осадок в процессе потучения "Оразы", .полученный осаждениемэтанолом при отношении 1:2, содержитпомимо целевого амилолитическогофермента и протеолитический,Полученный продукт - препарат "Ораза" обладает выраженным амилолитическим действием и используется как лекарственное средство для лечения желудочно-кишечных заболеваний 11Однако известный способ не обеспечивает возможности получения нового ферментного препарата - асперазы, хотя препарат "Ораза", получаемый из этого же сырья казанным способом содержит небольшие примеси продукта ферментативной природы, обладающего протеолитической активностью (40- 50 ед/г).Таким образом, ине обеспечивает воз891777 Формула изобретения Способ получения ферментного пречпарата асперазы, о т л и ч а ю щ и ис я тем, что поверхностную культуру40 Азрег 9111 цз огугае подвергают экстРакции водой, из полученного экстракта осаждают комплекс ферментов этанолом при отношении объема 1:2, осадок растворяют в воде при отношении45 веса 1:(3-4) и осаждают асперазуэтанолом при отношении объема 1:(0,40,6) с последующим перерастворениемосадка в воде при отношении веса1:1 и переосаждением этанолом при50 отношении объема 1:(0,9-1,1).Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССР9587150, кл, С 12 0 13/10, 1976 (проу тотип).Тираж 531 Подписноеу Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная,4 и медико"биологических средств воздействия на живой организм, а также комплексное использование сырья.Указанная цель достигается способом получения нового ферментного препарата асперазы, который заключается в том, что поверхностную культуру Азрег 9 11 1 цз огугае подвергают экстракции водой, из полученного . экстракта осаждают комплекс Ферментов этанолом при отношении объема 1:2, осадок растворяют в воде при отношении веса 1:(3-4) и осаждают асперазу этанолом при отношении объема 1;.(0,4-0,6) с последующим перераспределением осадка в воде при отношении веса 1:1 и переосаждением этанолом при отношении объема 1:(0,9-1,1).Аспераза относится к протеазам типа трипсина (КФ 3.4,4.4) .Предлагаемый способ основан на выделении ферментного препарата асперазы из выращенной поверхностным способом культуры Азрегу 111 цз огукае (т.е, Амилоризина Пх).Выход препарата составляет 0,22- 0,257 от исходного сырья, протеолитическая активность - .150-160 ед/г. Препарат представляет собой порошок от светло-желтого до буровато-серого цвета со слабым специфическим запахом, растворимый в воде и нерастворимый в этаноле, хлороформе, ацетоне, эфире и других органических растворителях.П р и м е р. 1 20 кг поверхностно выращенной культуры гриба Азрегц 111 цз огу 2.ае загружают в батарею перколяторов и подвергают экстракции водопроводной водой, Из полученных 60 л экстракта осаждают сумму Ферментово.исчерпывающим объемом 96 -ного этанола (по объему). Полученный осадок растворяют в дистиллированной воде в соотношении 1:4 по весу и фракционо но осаждают 0,5 объемами 96 -ного этанола (по объему), полученный осадок растворяют в дистиллированной воде 11 (по весу), удаляют нераство" рившуюся часть путем центрифугирования, а из фугата переосаждают одним объемом 96-ного этанола целевой продукт, который промывают этанолом и сушат на воздухе. Протеолитическая активность 150-160 ед/г, выход 295 г,ВНИИПИ Заказ 11152/39 Кроме получения нрепара 1 а пр толитического действия, способ позволяет комплексно использовать сырье1и повысить амилолитическую активностьпрепарата "Оразы" до 280-340 ед/г,а также утилизировать отходы производства препарата "Оразы".Проведенные Фармакологические исследования показывают безвредность 10 препарата и его специфическое дейст -вие. Препарат асперазы обладаетвыраженным протеолитическим действи. ем, которое характеризуется способностью расщеплять белки, например 1 З казеин до продуктов, не осаждаемыхтрихлоруксусной кислотой, а такжеможет найти применение в Ферментнойи пищевой промышленности.Ферментный препарат протеолитцческого действия проявляет выражен-ное лизирующее действие в отношениинекротических биосубстратов: ожогового струпа, гнойно-воспалительногосекрета гайморовой полости, сгустковкрови и тромбов, прй внутрибрюшинном введении оказывает противовоспалительное действие, вызывая уменьшение экссудативных явлений, вызванных рядом Флотогенных агентов и при 30ингаляционном пути введения в дозах0,4-1,6 ПЕ/кг не оказывает токсического, влияния на Функциональноесостояние жизненно важных органов.