Способ количественного определения глюкозы

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Сецжщистических Реснубник(22) Заявлено 230779 (21) 2818818/28-13с присоединением заявки Йо 6 01 й 33/66 Государственный комитет СССР ио дедам изобретений и открытий(71) Заявитель Ордена Ленина институт химической физики АН СССР(54 ) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ Изобретение относится к технйкеколичественного определения глюкозыи может быть использовано в клинической практике, в микробиологической,пищевой и других отраслях народногохозяйства.Известен способ количественногоопределения глюкозы путем инкубациипробы в среде, содержащей глюкозоксидазу, тетраэолий, феназинметасульфат и буфер 1,Однако известный способ недостаточно точен, так как ферментативную реакцию проводят при рН б,б или 7,0,что отрицательно влияет на точность 15определения и нижний предел определяемых концентраций глюкозы. ЦЕль изобретения - повыаение точности способа. 20Поставленная цель достигается тем, что в предлагаемом способе количественного определения глюкозы путем инкубации пробы в среде, содержащей глюкозоксидазу, тетразолий, 25 фенаэинметасульфат и буфер, инкубацию ведут при рН среды, равном 7,5- 8,0,Способ осуществляют следующим образом. В исследуемую среду, содержащую искусственный субстрат - глюковоксидазу, вносят феназинметасульфат (ФМС), вторичный акцептор электронов для проведения фотометрической регистрации реакции восстановления ФМС н буфер. Вторичными акцепторами могут быть 2,6-дихлорфенолиндофенол или тетразолиевые красители: нитротетразо лиевый синий, тетранитротетразолиевый синий,;нитротетразолиевый фиолетовый и т.д. Инкубацию ведут при рН среди, равном 7,5-8,0. Восстановление вторичного акцептора протекает спонтанно с большой скоростью и не требует присутствия в среде катализатора.Процесс протекает по следующей схе" ме: О-глюкоза + ФМС глюкозоксидаза - клюконо -лактон + ФМС + втоЬос ричный акцептор ФМС + вторичныйои окакцепторСодержание глюкозы определяют либо из калибровочного графика зависимости скорости и ферМентативной реакции от концентрации глюкозы, либо из графика зависимости конечных значений оптической плотности исследуемых растворов, соответствующих полному проте857874 Формула изобретения Составитель А.БражниковаТехред С. Мигунова Корректор Н Швыт кая Редактор О.Малец Заказ 7233/73 Тираж 907 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 канию ферментативной реакции, от концентрации глюкозы.Для осуществления предлагаемогоспособа используют спектрофотометрыили фотоэлектроколориметры широкогоназначения. В данном случае используют фотодетектирующее устройство,которое позволяет после предварительной настройки по стандартным растворам производить считывание показанийнепосредственно в единицах концентрации глюкозы, например в мг,Ъ. 10П р и м е р 1. Калибруют приборпо стандартным растворам глюкозы.К 1,5 мп фосфатного буферного раствора рН 80 (0,05 М) в 1 см стеклянной кювете добавляют 0,5 мл раствора ФМС в концентрации 5 10 М, 0,5 млраствора тетранитротетразолиевогосинего в концентрации 2 мг/мл,0,1 мл раствора глюкозоксидазы ьконцентрации 10 М. Начальное погло Ощение раствора компенсируют, принимаяего за 0-точку отсчета. Добавляют50 мкл стандартного раствора глюкозы и через заданный промежуток времени считывают показания.25Концентрацию глюкозы варьируютот 1 до 400 мг. Ъ.П р и м е р 2. Определяют воспроиэводимость показаний .прибора в разныхрежимах работы - по начальным скоростям и по конечной точке, при варьиро- ЗОванин концентрации глюкозы от 25до 100 мг %,Считывание результатов проводят через равные промежутки времени: 1,2,и 3 мин - кинематический режим рабо- З 5ты, 5 мин - по конечной точке. Длянаглядности результаты, получаемые при концентрации 100 мг Ъ, принимают за 100.Установлено, что наименьшая ошибка, меньше 11, получена в кинетическом режиме работы при считывании результатов через 2 мин.П р и м е р 3. Определение концентрации глюкозы в образцах цельной крови проводят, как описано в примере 1, но к буферному раствору добавляют детергент Тритон Х, в количествах 1 мл/1000 мл. При добавлении 50 мкл крови в такой буферный раствор происходит моментальное разрушение эритроцитов, и раствор становится оптически прозрачным. Начальное поглощение раствора принимают эа "0" - точку отсчета.Предлагаемый способ количественного определения глюкозы обеспечивает по сравнению с известным повышение точности анализа и надежности получения достоверных результатов . и может быть широко внедрен в практику клинических лабораторий. Способ количественного определения глюкозы путем инкубации пробы всреде, содержащей глюкозоксидазу,тетразолий, феназинметасульфат и буфер, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения точности способа, инкубацию ведут при рН среды,равном 7,5-8,0.Источники информациипринятые во внимание при экспертизе1. Патент СШЪ 9 3791988,кл. 252-413, 1974.