Способ определения липидного сос-taba биологических жидкостей

Союз Советских Социалистических РеслубликОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ и 840740(22) Заявлено 300779 (21) 2813832/28-13 с присоединением заявки йо С 01 Н 33/92 Государственный комитет СССР по делам изобретений я открытийДата опубликоваиия описания 230681 удар ЪЪ 1 щ -нститут им. Н.И. Пирогова(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИПИД БИОЛОГИЧЕСКИХ жИДК:1), проводяную сь фильтенный-ногосильноследующеатуре.Обводный ио рхний слв пальч и выпар при 40- уйным на Изобретение относится к медицинеи может быть использовано в клинической биохимии.По основному авт. св. Р 526824 известен способ определения липидногосостава биологических жидкостей путемэкстракции жира хлороформ-метаноловой смесью, разделения экстракта хроматографически на закрепленномтонкомслое и определения количественногосостава липидов на денситометре.илифотометрическиОднако этот способ не обеспечиваетвысокой точности,Цель изобретения - повышение точности способа.Поставленная цель достигается тем,что согласно способу определения липидного состава биологических жидкостей исследуемую кровь предварительноперед экстракцией смешивают с 5-нымраствором лимоннокислого натрия всоотношении 4:1.П р и м е р 1. 0,1 мл капиллярной крови (микропипетки перед заборомкрови ополаскивают лимоннокислым натрием) смешивают в обыкновенной.пробирке с 0,025 мл 5-ного растворалимоннокислого натрия трехзамещенногоприбавляют 10 мл экстрагирующей смеси 1 хлороформ с метанолом 2бирку помещают на 10 мин вбаню при 40-45 С. Затем смеруют через бумажный обезжир.фильтр, добавляют 2 мл 0,74раствора хлористого калия,встряхивают и оставляют дого дня при комнатной темперразуется 2 слоя: верхнийнижний - хлороформенный. Веудаляют, а нижний переносятсмешивают с 0,5 мл метанолавают досуха в водяной бане45 ОС под вакуумом с водостр сом.Полученный ликвидный экстракт в тот же день наносят на хромотографическую пластину, которую приготавливают следующим образом. В стаканчике Хагидорн смешивают 4 г силикагеля Н по 600 мг гипса медицинского, 13 мл воды и 2 мл закрепителя, например 2-ного раство" ра крахмала (берут крахмал особой чис тоти), смесь наносят ровным слоем на стеклянную пластину 13 х 18 и оставляют при комнатной температуре до следующего дня, затем активируют тридцать минут при температуре 90-95 фС. После охлаждения на воздухе пластина готова к работе.840740 После охлаждения проводят количественный анализ липидов путем прямой денситометрии или злюирования краски из пятен с последующей фотометрией окрашенных элюатов. П р и.м е р 2. В начале используют цитратную кровь для постановки РОЭ, а потом в этой же крови определяют липидный и Фосфолипидный спектрыДля этого капиллярную пипетку на РОЭ промывают лимоннокислым натрием, затем набирают этот оаствор до метки Р и выдувают его в видалевскую пробирку, Тем же капилляром берут из пальца обследуемого 2 раза кровь до метки Р , смешивают с лимоннокислым натрием в соотношении 4:1. Набирают в капилляр эту смесь до метки 0 и определяют РОЭ.По окончании определения РОЭ из капилляра выдувают содержимое обратно в видалевскую пробирку, берут отсюда 0,125 мл лимоннокислой крови (соответствует 0,1 мл Цельной крови) определяют в .ней липидный и фосфолипидный состав по примеру 1, т.е. к 0,125 мл цитратной крови прибавляют 10 мл экстрагирующей метанол-этаноловой смеси и далее по примеру 1.Сравнительные показатели способов количественного анализа липидов крови представлены в таблице. Показатели, моль л звестый 5 + 0,035 0,6 + 0,0 2 1,6+0,0 Предл гаемы 0,1 1,5 + 0,045 0,5 Т 0,031 0,6+ 0 вт. св, Р 526824, о т л и и й с я тем, что, с цель ия точности способа, иссле ровь перед экстракцией сме Ъ-ным раствором лимоннокис ия .в соотношении 4:1. Источники информации принятые во внимание при э 1. Авторское свидетельс Ф 526824, кл. С 01 М 33/16а воляет ть исследо объем аначаюю повышедуемуюшивают с лого нат 5 Форму изобретен Ркспертизтво СССРалютиШ Ре тор орректор Г т аказ 4152/64 ВНИИП по 11303Тираж 907И Государственн делам изобретен 5, Иосква, ЖП фПатентф, г, Ужго Подписмитета СССРткрытийская наб., д. огоий иРа Филиал од, ул. Проектная За 1-2.ч до начала хромотографии в банки наливают систему растворителей для разделения липидов в одной (гексан, эфир, ледяная уксусная кислота в соотношении 80:20:1,5) и фосФолипидов в другой (хлороформ,.метанол, вода в соотношении 65:25:4).Высота жидкости в банке не должна пре, вышать 0,5-0,7 см.Липидный экстракт из цитратной крови растворяют в 0,2 мл гексана и по 0,05 наносят на пластины, отступая ",5-2 см от нижнего и боковых краевИнтервалы между пробами 2 см; Из одной и той же пробы экстракт наносят на 2 пластины: для разделения липидов на одной и фосфолипидов на 15 другой, После .нанесения проб пластины помещают в банки с системой растворителей.Высота подъема растворителей по. адсорбенту 10.см. 20ф Время хромотографирования липидов 20-25 мин, фосфалипидов 40-45 мин.По окончании хромотографирования пластины подсушивают при комнатной температуре .под вытяжкой до полного испарения с адсорбента растворителя и опрыскивают 2-ным спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты по 5 мл красителя на одну пластину. Затем пластины помещают в сушильный шкаф на 10 мин при 90-95 Со для проявления окраски. Предлагаемый способ п 2-3 раза повысить точн аний, уменьшить в 2 раэ изируемой крови.Способ определения липидного сава биологических жидкостей по