Способ приготовления гистологическогопрепарата

ОП ИСАНИЕИЗОВРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРесттублик.Гесударстнеииый кнмитет во делам иэебретеиий и аткрмтий(54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТАИзобретение относится к технике подготовки биологических препаратов, в частности, тканей и органов животных для гистохимического, иммунохимического и морфологического исследования под микроскопом и может быть использовано в медицине, биологии,Известен способ приготовления гистологического препарата путем заключения биологического материала в заливочную среду 1 Однако известный способ не обеспечивает сохранности структуры.Цель изобретения - обеспечение сохранности структуры. Эта цель достигается тем, что приготавливают гистологический препарат путем заключения биологического материала в заливочную среду, при этом биологический мате,риал обрабатывают смесью состава, вес.%:Полиэтиленгликольй.в 1000 в 15 95 - 97 Целлоидин 3 - 5 при температуре 37 в течение 22 - 24 ч, а затем смесью состава, вес.%: Полиэтиленгликольм.в 2000 - 4000 78 - 83 Целлоидин 7 - 1 О Силикагель л 5/40 мк 10 - 12при комнатной температуре в течение 22 - 24 ч.П р и м е р 1. Кусочки печени крысы размером 3 мм фиксируют в жидкости Уарнуа в течение 2 ч, Фиксированный объект для обезвоживания переносят в 70%-ный этанол на 20 мин, после чего его переносят на 30 мин в 75%-ный полиэтиленгликоль с м.в. 300, а затем на 2 ч в 100%-ный полиэтиленгликоль с тем же молекулярным весом. Обезвоживание проводят при комнатной температуре, причем 100%-ный полиэтиленгликоль в течение 2 ч сменяется дважды. Уритерием обезвоживания служит опускание исследуемого объекта на дно стаканчика.После обезвоживания объект переносятв пропитывающую среду следующего состава; полиэтиленгликоль с м.в. 1000 - 95%, целлои дин 3%-ный на 24 ч при 37 (в термостате),причем критерием пропитывания объекта является опускание его на дно сосуда.Затем объект ополаскивают в заливочной. среде с м.в. 1500, опускают на дно часово834436 Составитель С. Малютина Редактор Е. Лушникова Техред А. Бойкас Корректор О. Билак Заказ 4002/62 Тираж 907 Подписное ВНИИ ПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4го стекла с заливочной средой следующего состава: полиэтиленгликоль с м,в. 1500 с концентрацией 78/д целлоидин 7%, силикагель Л 5/40 мк 10 о/ Получают срезы 3 - 6 микрон.При применении целлоидина с меньшей концентрацией, чем 7/о, приводит к тому, что не образуется пленка на срезах, предохраняющая их от разрушения.П р и мер 2. Условия те же, что и в примере 1, но пропитывание объекта проводятн10 средои следующего состава: полиэтиленгликоль с м.в, 1000 96/о, целлоидин 4%. Затем объект заливают средой следующего состава: полиэтиленгликоль с м.е. 2000 80% целлоидин 8/о, силикагель Л 5/40 мк 11%. Использование полиэтиленгликоля с м.в. 2000 позволяет получать серийные срезы от 1 до 3 микрон при комнатной температуре (т - 20).П р и м е р 3. Условия те же, что и в примере 1, но пропитывание объекта проводят средой следующего состава: полиэтиленгликоль с м.в. 1000 97%, целлоидин 5%. При дальнейшем увеличении концентрации целлоидина затрудняется пропитка объекта.Затем объект заливают средой следующего состава: полиэтиленгликоль с м.в. 4000 83%, целлоидин 10/о, силикагель Л 5/40 мк 12%. Повышение концентрации целлоидина отрицательно действует на пол чение ровных серийных срезоврименение заливочной среды, включающей полиэтиленгликоль с м.в. 4000, позво ляет получать серийные срезы толщиной 1 - 3 микрона в жаркое время года при 1 25 - 28 С.В отличие от ранее применявшихся способов расправления полученных срезов предлагаемым способом, нагревательные столиЗ 5 ки не применяют. При хорошо наточенном микротомном ноже лента с серийными срезами получается достаточно ровной, Срезы . переносят на предметное стекло, пипеткойу края ленть 1 со срезами наносят 1 - 2 капли 40 буфера, гипертонического раствора или дистиллированной воды в завцсиаости от исследования. Предметное стекло со срезами держат под небольшим углом и капля раствора или дистиллированной воды сбегает по срезам, расправляя их. Эта процедура расправления срезов связана с растворением полиэтиленгликоля. Вокруг срезов остается тонкая прозрачная пленка целлоидина,-который практически не мешает исследованию объекта под микроскопом и сохраняет эти срезы. При необходимости эту пленку можно растворить смесью спирта с эфиром перед заключением препарата в бальзам.Полученные срезы с биологическим объектом можно использовать как для морфологического, так и для цито-гистохимического исследования большой группы химических соединений: белков, нуклеиновых кислот, ферментов и др.Процесс обработки биологического материала, расправл ение полученных срезов, вплоть до окраски гистологических срезов, исключает действие агрессивных веществ на исследователя.Предложенный способ позволяет получать серийные срезы различной толщины (от 25 до 1 микрона) как с фиксированных, так и нефиксированных, с трудно и легко оежущихся объектов, а также получать гис. тологические препараты с практйчески не нарушенной структурой клеток и тканей. Формула изобретекияСпособ приготовления гистологического препарата путем заключения биологического материала в заливочную среду, отличаои 4 ийся тем, что, с целью обеспечения сохранности структуры, биологический материал обрабатывают смесью состава, вес,%:Полиэтиленгликольм.в. 1000 - 1500 95 - 97 Целлоидин 3 - 5 при 37 С в течение 22 - 24 ч, а затем смесью состава, вес,/о:Целлоидин 7 - 10 Силикагель л 5/40 мк 1 О - 12 Полиэтиленгликольм.в. 2000 в 40 Остальное при комнатной температуре в течение 22 - 24 ч. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1, Лилли Р, Патогистологическая практика и практическая гистохимия, М., 1969, с. 65 - 81.