Способ консервирования лейкоцитов

Союз СоветскикСоциалистическиеРеспублик ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУОпубликовано 30.04.81. Бюллетень16Дата опубликования описания 05,05,81 лв лелем нзееретени и еткрытнм(72) Авторы изобретения 1 1нститут проблем криобиологии и криомдицитты"АН Украинской ССР 1) Заявител 4) СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ЛЕЛКОЦИТО я к медицине Изобретение относиименно гематологии.Известен способ концитов путем заморажиполиэтиленоксидаОднако известныйвает высокой жизнесп я лейко сутствии сервирова ания в п пособ не особности обеспечи- лейкоциксиК подготовленнои 4,5 5%-ный криопро тем обрабатывают у 800 - 900 кГц мощно в течение 50 - 70 с этого осуществляют протектором в течени леикомассе ектор ПЭО льтразвуко стью 0,2 - при 20 - 2 квилибрац е 7 - 11 ми добавляют - 400 и зачастотой4 Вт/см 2 С. После ю с криотов.Цель изобретения - повышение жизнеспособности лейкоцитов.Указанная цель достигается тем, что консервируют лейкоциты путем замораживания в присутствии полиэтиленоксида, лейкоциты смешивают с 4,5 - 5,0%-ным полиэтилено дом, обрабатывают ультразвуком частбтой 800 - 900 кГц и мощностью 0,2 - 0,4 Вт/см в течение 50 - 70 с и выдерживают с криопротектором в течение 7 - 11 мин.Способ осуществляют следующим образом. Обработанную таким образом лейкомассу разливают в контейнеры и замораживают до - 196 С по двухэтапной программе: на 1 этапе со скоростью 1 - 2 С/мин от +20 С до температуры первичной кристаллизации с последующей выдержкой на плато в течение 5 - 7 мин, а на 2 этапе - от точки кристаллизации до - 196 С погружением в жидкий азот.Отогревают на водяной бане при 40 - 42 С, П р и м е р. Подготовленную лейкомассу разделяют на три части. Первую порцию оставляют нативной, ко второй приливают 4,6%-ный криопротектор ПЭО, а к третьей добавляют 4,6%-ный ПЭО, а затем обрабатывают ультразвуком частотой 800 кГц, мощностью 0,4 Вт/см в течение 65 с при 22 С. Эквилибрация с криопротектором во 2 и 3 порциях составляет 8 мин.Обработанную таким образом лейкомассу разливают в металлические контейнеры объемом 50 мл и полиэтиленовые ампулы по 1 - 1,5 мл и замораживают по двух- этапной программе: на 1 этапе - со скоростью 2 С/мин от 20 С до температуры первичной кристаллизации с последующей выдержкой на плато в течение 5 мин, на825081 15 Формула изобретения Составитель С. Малютина Техред А. Бойкас Корректор Г. Решетник Тираж 687 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д, 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгорбд, ул. Проектная, 42 этапе - от точки кристаллизации до - 96 с погружением в жидкий азот. Материал хранят в жидком азоте в течение 10 суток, отогревают на водяной бане при 42 С.Для определения жизнеспособности и функциональной активности клеток лейкоцитов до замораживания, а также после хранения их при низкой температуре ( - 196 С) используют следующие методы: подсчет ядросодержащих клеток в камере Горяева; супровитальное окрашивание 1%-ным водным раствором эозина по Шреку; подсчет лейкограмм, качественная оценка мазков; исследование электрокинетических свойств клеток после консервации; изучение фагоцитарной активности нейтрофилов; исследование миграционной активности лейкоцитов; исследование дыхательной функции лейкоцитов на распирометре автоматизированном универсальном.Клетки, обработанные ультразвуком, сохраняют миграционную активность и способность к фагоцитозу на уровне контрольных образцов. Потребление кислорода после низкотемпературного консервирования составляет 25 - 3,9 (контроль в нативн клетки 27,1+4,9), после замораживания с 4,6%-ным ПЭО14,0+ 2,6, Процент жизнеспособных клеток составляет 93,7+2,3 (контроль - клетки с ПЭОбез озвучивания 79,8 - 4,6) .При анализе лейкограмм отмечают сохранение всех клеточных форм лейкоконцентрата.Предлагаемый способ позволяет повысить качество размороженного материала и количество сохранившихся клеток после низкотемпературного консервирования на 13,9% 10 и может быть использован для повышенияэффективности низкотемпературного консервирования ядросодержащих клеток крови с меньшей концентрацией криопротектора. Способ консервирования лейкоцитов путем замораживания в присутствии полиэтиленоксида, отличающийся тем, что, с целью повы шения жизнеспособности целевого продукта,лейкоциты смешивают с 4,5 - 5,0%полиэтиленкосидом, обрабатывают ультразвуком частотой 800 - 900 кГц и мощностью 0,2 - 0,4 Вт/см в течение 50 - 70 с. и выдерживают с криопротектором в течение- 11 мин.