Способ идентификации -плазмид в штамме

ОПИ 787470 Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 050229 (21) 2720974/28-13с присоединением заявки Йо(51)М. Кл З С. 12 К 1/04 Государствеииый комитЕт СССР по делам изобретеиий и открытий(53) УДК 576. 8. 09331(088.8) Дата опубликования описания 151280(71) Заявитель Кубанский государственный медицинский институт имени Красной Армии(54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ В-ПЛАЗМИД В 0 ТАИМЕЕ 5 СНЕВСНА СО Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для идентификации В-плазмид, обусловливающих устойчивость к лекарственным препаратам большинства 5 .штаммов энтеробактерий.Известен способ идентификации В-плазмид в штамме ЕьсЬегсЬа со 1 путем внесения бульонной культуры ЕьсЬегсЬа со 11, содержащей нссле О дуемую В-плазмиду,к расплавленному и охлажденному агару с последующим контактом с лиэатом Фага, инкубированием посева и учетом результата по наличию или отсутствию зон просветле ния в растущей культуре. 1 .Однако данный способ не позволяет выявлять В-плазмиды групп несовместимости пс А и пс .Целью изобретения является выявле ние В-плазмид групп несовместимости 1 пс А и псЭта цель достигается тем, что в качестве исходной культуры используют штамм ЕзсЬег 1 сЫа со 1 И и кон тактируют с лнэатом фага Ъ .Способ осуществляют следующим образом.Несколько капель подрзщенняй бульонной культуры Е, сг 1 Н с иссле2дуемой В-плазмидой добавляют к расплавленному и охлажденному до 47 оС0,7-ному агару и смесь быстро выливают на поверхность питательного1,5-ного агара в чашку Петри. Кактолько поверхность агара подсохнет,ианее наносят каплю лнзата Фага ТЭ.После подсушивания чашки инкубируют втермостате. На чашке в месте нанесения лиэата фага, если плаэмида обусловливает чувствительность Е, со Нк Фагу Т, наблюдают большую зонупросветления со слабым вторичниа роС"том культуры. Если плазмида не обусловливает чувствительность Е. ве 1 Нк Фагу Ъ наблюдают г месте мамесения капли лизата фага сплоевной росткультуры,П р и м е р 1. 0,25 мл трехчасовой бульонной культуры Е, со 1 Н сплазмидой В 391 (группа несовместимости 1 пс ) добавляют к 2,5 мл расплавленного и охлажденного до 46 С,0,7-ного агара и смесь быстро выливают на поверхность 1,5-ного пита,тельного агара в чашку Петри.Как толзгко поверхность агара подсохнет.на иеенаносят каплю лиэата фага То, (титрфага - 1 Ф фаговых частиц в 1 мл).После подсушивания чашки ннкубиочот влс787470 Формула изобретения Составитель С,МалютинаТехред И. Асталош Корректор М,Демчик Редактор Т.Кинь Заказ 8279/26 Тираж 522 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 термостате при 37 оС 18 ч. На чашке в месте нанесения фаголиэата наблюдают большую зону просветления со слабым вторичным ростом культуры.П р и м е р 2. 0,3 мл трехчасовой бульонной культуры Е. со 11 И с плазмидой р 1 А 6012 (группа несовместимости 1 пс А) добавляют к 2,5 мл расплавленного и охлажденного до 47 оС, 0,7-ного агара и смесь быстро выливают на поверхность 1,5-ного питательного агара в чашку Петри. Как только поверх- кость агара подсохнет, на нее наносят каплю лизата фага Т(титр фага - 1 Ф фаговых частиц в 1 мл). После подсушивания чашки инкубируют в термостате при 37 оС 16 ч, На чашке в месте 15 нанесения фаголиэата наблюдают большую зону просветления со слабым вторичным ростом культуры.П р и м е р 3. 0,3 мл трехчасовой .бульонной культуры Е.со 11 М с плазми- щ дой й 621 а (группа несовместимости 1 яс 1) добавляют к 2,5 мл расплавленного и охлажденного до .47 оС 0,7- ного агара и смесь быстро выливают на поверхность 1,5-ного питательного агара в чашку Петри. Как только поверхность агара подсохнет, на.нее наносят каплю лиэата фага Т (титр фага - 108 фаговых частиц в 1 мл), После подсушивания чашки инкубируют в термостате при 37 оС 17 ч. На чашке ЗО в месте нанесения фаголиэата наблюдают сплошной рост культуры.Предложенный способ позволяет с помощью фага Т в штамме Е, со 11 И идентифицировать плазмиды группы несовместимости яс А (плазмида р 1 А 6012) и 1 пс Э (плаэмида й 391). Способ идентификации й-плаэмид в штамме ЕвсЬег 1 с 61 а со 11 путем внесения бульонной культуры ЕьсЬег 1 сЬ 1 а со 11, содержащей исследуемую й-плаэмиду, к расплавленному и охлажденному агару с последующим контактом с лизатом фага, инкубированием посева и учетом результата по наличию или отсутствию зон просветления в растущей культуре, о т л и ч а ю щ и й с. я тем, что, с целью выявления й-плазмид групп несовместимости 1 пс А и 1 пс 1, в качестве иСходной культуры используют штамм ЕсЬег 1 сЬ 1 а со 11 И и контактируют с лизатом фага Т 3. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Кудлай Д.Г. Внехромосомные факторы наследственности бактерий и их значение в инфекционной .патологии. М., "Просвещение", 1977, с.176.