Способ выявления сосудов гемоциркуляторного русла

ОПЙСАНИЕ н 11767611 Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 221178 (23) 2687494/28-13 (51) М Кп3 с присоединением заявки МЗ(23) Приоритет С 01 М 1/28 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытийДата опубликования описания 300980(72) Автор изобретения Н.А, Колесова Киевский медицинский институт им. А.А. Богомольца(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ СОСУДОВ ГЕМОЦИРКУЛЯТОРНОГОРУСЛА конечнаяконцентрация 83 10-4 М 8,0 10 М 3,6 10 М 1,7 10 М Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для морфо-функционального изучения гемато-гистиоцитарных барьеров и 5 транскапиллярного обмена органов и тканей в физиологических условиях, а также для морфологической диагностики препатологических и патологических процессов различного генеза, 1 связанных с изменением обмена, структуры и Функции гемомикроциркуляторного русла. Известен способ выявления сосудов гемоциркуляторного русла путем приготовления срезов в криостате сепоследующим определением активности аденозинтрифосфатазы.Однако известный способ не обес печивает высокой точности.Целью изобретения является повышение точности способа.Эта цель. достигается тем, что после определения активности адено зинтрифосфатазы производят окрашивание срезов пикрофуксином в течение от 4 до 7 мин и по структуре баэальных мембран определяют сосуды гемоциркуляторного русла. Способ осуществляют следующим образом.Из исследуемого кусочка ткани (биопсийный, экспериментальный или секционный материал) без предвари,тельной фиксации в криостате или на замораживающем микротоме изготавливают серийные срезы толщиной 10 мк и монтируют их на чистые обезжиренные и)предварительно охлажденные предметные стекла. Срезы подсушивают на воздухе при комнатной температуре в течение 8-10 мин.Инкубацию срезов проводят в термостате при 37 С в течение 45-60 мин в инкубационной среде следующего сос" тава: 20 мл 125"мгВ АТф767611 Составитель С.МалютинаРедактор Г.Прусова Техред Ж, Кастелевич КорректорвЗаказ 7184/39Тираж 1019 ПодписноеВНИИПИ государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5М, Демчйк Филиал ППП фПатент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Тщательно промывают в дистиллированной воде. Затем обрабатывают 1- ййм водным-раствором желтого сульфида аммония .в течение 1 мин. Споласкивают в дистиллированной воде, Фиксируют срезы в 10-ном растворе нейтрального формалина в течение 5-10 Мин. После этого промывают в дистиллированной воде в течение 1-2 мин. Обрабатывают пикрофуксином следующего состава: 10 частей насыщенного на холоде водного раствора пикриновой кислоты и 1 часть 1-ного водного раствора кислого фуксина - в течение 4-7 мин. Быстро обезвоживают в 9 бф-нсм сйирте, просветляют в ксилоле и эакюночают в канадский бальзам.Эндотелнй сосудов гемомикроциркуляторного русла приобретает разлнчнйе оттенки коричневого цвета в за-, висимости от количества конечного продукта реакции, т.е. от активности аденозинтрифосфатазы; базальные мем- ; брайИсосуКов и волокна соединительной ткани воспринимают красные тона, а при нарушении химизма коллагена - различные переходные оттенки от красного, через оранжевый к желтым тонам. " Параллельйо выявляется активность аденозинтрифосфатазы перицитов и клеточных элементов периваскулярйой" соединительной ткани.Результаты гистохимической реакЦиидценивают количественно либо цитоснектрофотометрически, либо путемвычисления гистохимического показателя. Наряду с этим, определяют толщи ну баэальной мембраны одним из адекватных для данного исследования морФометрических методов и ее химизм, атакже состояние волокнистого компонента периваскулярной среды обмена(по количественной характеристике коллагенообразования и качественнымсвойствам коллагена).Применение предлагаемого способа;позволяет реально оценить существующиев тканисосудисто-тканевые взаимоотношения и состояние транскапил 1 ч лярного обмена за счет получения нового эффекта - одновременного определения энергетического обмена в эндоТелии и перителии микрососудов, атакже информации о структуре и химизме базальной мембраны и периваскулярной среды обмена. Предлагаемый способ,помимо значительной информативности,отличается большой экономией времени,позволяющей применять его для срочного морфологического исследования и З диагностики препатологических и патологических процессов, связанных снарушением транскапиллярного обмена,Формула изобретения 2Способ выявления сосудов гемоциркуляторного русла путем приготовлениясрезов в криостате с последующим определением активности аденозинтриФосфатазы, о т л и ч а ю щ и й с я Зф тем, что, с целью повышения точностиспособа, после определения активности аденозинтрифосфатазы производятокрашивание срезов пикрофуксином втечение от 4 до 7 мин и по структуре баэальных мембран определяют сосуды гемоциркуляторного русла.