Способ получения целлюлозы

Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 090877 (21) 2516757/28-1 рисоединением заявки М 9 13 1 сударственный комитет СССР о дедам изобретений и открытий23) Приорите Опубликовано 050380. Бюллетень 9 9 Дата опубликования описания О 50380Карклинь,(71) Заявител 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕ ерода и ФосФораи сернокислыйсточника азота- источник 1 Ооспособа препарата 0 ед/г, тся повии упрощеО 53 4 реде,ка 3-6-2 в :одерж Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именнок способу получения и выделения фермента целлюлазы.Известен способ получения целлюлазы, предусматривающий культивирова"ние гриба рода Тг 1 с)тос 1 егща, концентрирование культуральной жидкости ипоследующее выделение, ферментаосаждением сульфатом аммония и иэпропиловым спиртом .11,Недостатками известногоявляется низкая активностьцеллюлаэы, составляющая 12а также сложность процессаЦелью изобретения являешение активности ферментание процесса.Цель достигается тем, что в качестве продуцента используют грибТг 1 спойегтпа 11 дпогяп ОМ 534-6-2,а осаждение ведут в соотношении иэопропиловый спирт:концентрат культуральной жидкости 0,08-0,20:1.2Способ осуществляют следующимобразом,Гриб Тг 1 сйос 1 егтпа 119 погцт ОМыращив ают на питатель ной сащей молочную сыворотку в честве источника углтазотнокислый натрийаммоний в качестве ии сернокислый магниймагния,Через 50-60 ч культивированиябиомассу отделяют Фильтрованием,а культуральную жидкость концентрируют в вакууме в 6-10 раз, Фермент выделяют из концентрата приохлаждении осаждением 45-65 суль -фата аммония, а затем изопропилового спирта, который добавляют к концентрату культуральной жидкости всоотношении 0,08-0,20:1 . Образовавшийся верхний слой, содержащий осадокФермента, центрифугируют. Последиализа лиофильной сушки получаютпрепарат фермента, целлюлолитическая активность которого составляет1700-2500 ед/ч.Описанные штамма гриба Тг 1 споЙегта 11 дпогцв ОМ 534 - 6 - 2.Штамм гриба Тг 1 с)тос 1 егща 119 погцвОМ 534-6-2 - продуцент целлюлолитических Ферментов, Хранится в музеелаборатории регуляции биосинтеэаферментов Института микробиологииАН Белорусской ССР,720010 Формула изобретения ЦНИХПИ Заказ 10161/18 Тираж 522 Подписное Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул, Проектная,1 Культурально-морФологическиепризнаки,Сусло агар: на 4-е сутки ростапри 29 С диаметр колонии 6-7 см, возцушный мкцелий белый, равномерноприподнят по краю колонии, конидиив центре, центр сплошной, уплотнен,зеленого цвета, втянут, в агаре неврастает, рост концентрический,Среда Чапека с сахарозой: колонияна 4-е сутки заполняет всю чашу, мицелий белый, стелющийся, быстро растущий, конидии н виде отдельных плот -ных образований без хохолков, темнозеленого цвета, расположены на кон -центрической окружности на некоторомрасстоянии от центра.15Синтетическая среда с кукурузнымэкстрактом: рост активный на 3 - исутки колония на всю чашку, воздушный мицелий войлочный, белый илисероватый, по краю колонии припод- Онят, конидиеобразование обильное,конидии н центре, центр колонииуплотнен, сплошной, темно-зеленогоцвета, ограничен концентрически,Картофельно-декстрозный агар: 25КОЛОНИИ На 4-е сутки 9-10 см, крайровный, воздушный мицелий пушистый,белый, конидии в центре объединеныв густо расположенные подушечки,среда не пигментирована. 3 ОЦитология на сусло-агаре,При 29 С набухание конидий 4-5 ч,прорастание с обоих концов 7-8 ч,нетвление гифов через 18-20 ч, мицелий септиронан, не дифференцирова.н,в клетках несколько ядер, размеыклеток мицелия 3-5 х 15-20 щ, конидиеносцы Формируются на 32-34 ч в н."дебоковых ответвлений гиф див илитрихотомически разветвленные, бес -цветные; стеригмы бутыльчатые утол 4 Оценные посередине, супротивные илимутончатые, размеры 3-5 хб - 10 ыс,конидии окончательно формируются к42-46 ч, округлые или эллипсовидные, размеры 2,.-3,5 мк и 2,.5- 452,9 х 3,7-3,9 мк соответственно, свдним ядром, в массе зеленого цвета,Физиолого- биохимические свойстваАктивно гидролизует крахмал,молоко свертывает на 4-5 сутки (РП 505,8- 6,0), пептониэирует его медленнок 20-25 суткам (РН 7,8-7,9);тину не разжижает; исгользует амконийную, нитратную, белковую Формыазо"а," ассимил%рует глюкозу, галактозу р мальтозу р иноэит р ксизОлу углицерин, маннит, рамноэу, сорбит,особ нно активизирует лактозу,с харозу, арабинозу.(Отамм обладает высоким уровнемсинтеза целлюлаэы, активно продуци)рует Фермет при росте а отходемолочной промышленности - молочнойсыворотке (лактозе), имеет сокра -щенный период Ферметации - 56-64 ч,П р и м е р 1, Дя приготовлениясреды молочную сынсротку отделяютот белка антокланированием при 120 Сн течение 30 мин, Ссадок белка от -деляют Фильтрованием, а растворразбавляют водой в соотношении 1;2.Гриб Тг 1 сЬос 1 епюа 11 дпогищ ОМ 53 4 -6-2 выращивают на среде следующегосостава,Молочная сыворотка (раз -банлен ная водой ) 33Азотнокислый натрий 0,3Сернокислый аммоний 0,05Сернокислый магний 0,05Культивирование ведут гри 28 Сн течение 50 ч. Биомассу отделяютФильтрованием, а культуральную жидкость концентрируют н вакууме уменьшая в 8 раз по объему. К 10 л охлажденного до 10"С концентрата добавляют 5 кг сернокислого аммония. Отстаивают 10 ч, добавляют 1,3 л изопропи -лового спирта, размешивают, отстаива -ют 15-20 ми, разделяют слои и нерхний слой центрифугируют при3000 об/мин н течение 20 мин, Осадокрастворяют н деминерализованнойводе и диализуют против деминерализованной воды н течение 20 ч. Высуши -вают лиофильно. Выход 0,.6 г препа-тас ) л Фильтрата культуральной жид;-:Ости. Актинность 2500 ед/г содержа -ние белка 80%,Таким образом, даный способ поз -золяет повысить активность целлюлазыв ) 5-17 раз по сравнению с изнестнымспо:обом, а также упростить и ускорить процесс биосинтеэа и выделенияФермента. Способ получения целлюлазы, гредусматривающий культинироваие грибарода Тг 1 сйос 1 егюа, концентрированиекуль турель ОЙ жидкос ти и ;Ослед ующеевыделение Фермета осаждением суль -Фатом аммония и иэопропилоны спиртом, о т л и ч а ю щ и й с я тем,.что, с целью повышение активностифермента и упрощения процесса, н качестве продуцента используют гоибТг 1 сйос 1 еггпа 11 спогып ОМ 534-6-2,а осаждение ведут в сооношениииэопропилоный спирт: концентраткультуральной жидкости 0,08-0,20:1.,Источники информации,гринятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство9495347, кл. С 12 П 13/10, 1973.