Способ определения сенсибилизации лейкоцитов к антигенам

111712078 ОП И САН И ЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(51) М, 1(;1 с 1 В 10/00 11 ч ЗЗ/16 нением заявкис присо осударственныи комите СССР(088.8) по делам изабретеиий и открытий5) Дата оп 1 икования описания 30.01.8 2) Авторы изобретения Д. К. Но ков, В. И. Новикова и А, П. Шмаков итебский 1) Заявитель 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ ЛЕЙКОЦИТОВ К АНТИГЕНАМИзобретение оцины и биологииио для выявлениятов к различнымИзвестен спосозации лейкоцитовления лейкоцитовванием и оценкоенсибили тем выдс их Отмы зультатов Однако известный способ ие обеспечивает высокой чувствительности определения.Целью изобретения является повышение чувствительности определения.Эта цель достигается тем, что лейкоциты перед обработкой антигеном преинкубируют при температуре 4.+2,0 С в течение 12-+6,0 ч в бессывороточной физиологической среде.П р и и е р 1. Лейкоциты выделены из крови 25 детей, больных пневмониями и сепсисом, имеющих бактериальную аллергию. Их отмывают 3, а в контрольных опытах 6 раз раствором Хенкса, центрифугируя при 500 об/мин, и взвешивают в этом растворе при концентрации 5 млн/мл. Ипкубируют при 4 С 12 ч. Для контроля аналогично инкубируют часть крови тех же больных с невыделенными лейкоцитами. Их выделяют из нее после инкубации при 4 С 12 ч. Затем надосадочную жидкость слпва 1 от, отмывают лейкоциты один раз раствором ственный медицинский институт Хенкса, взвешивают в этом растворе и используют в реакции лизиса лейкоцитов с бактериальными антигенами.В этой же реакции испытывают с бактс риальными антигспами свежие отмытысле 11 коциты из той же крови, а также лейкоциты, выделенные из крови, преинкубированно 11 при 4 С 12 ч. Однако такая сенсибилизация выявляется с лейкоцитами, вы О деленными и преинкубированными в растворе Хенкса.Влияние преинкубации лейкоцитов в растворе Хенкса иа выявление их сенсибилизации к бактериальным антигенам показано 15 в табл. 1.Результаты (см. табл. 1) показывают, чтов ряде случаев сснсибилизация лейкоцитов к бактериальным антигенам не выявляется с обычными лейкоцитами и полученными ",о из крови, преинкубированной при 4 С 12 ч.П р и м ср 2. Из крови 24 больных ракомжелудка 111 - 1 Ъ стадии, взятой в стерильные пробирки, выделяют лейкоциты, отмывают их 3 раза стерильным раствором 25 Хенкса, центрифугируя при 500 об/мин.Часть осадка лейкоцитов взвешивают в среде 199 без сыворотки в другую часть тех же лейкоцитов добавляют 10% аутологичной плазмы. 1(онцентрация лейкоцитов - 30 10 млн/мл. Со свежими, не инкубированны712078 Таблица 1 Положительные реакции с лейкоцитами Количество обследованных оольных18(5) 18 10 Гемолитический стафилококкГемолитический стрептотококкПротей мирабилис 12(1) 17(6) 9(4) 12 26 7(2) П р и и е ч а н и е. В скобках - случаи ноложител(и(ых реакций, нс имевшиеся до ире(гнкубации. Таблица 2 Положительная реакция подавления миграции в лейкоцитамиКоличество Преинкубированными при 4 С 12 ч Исходнымиобследованных Антигены больных В среде 199 с О зяаутонлазмы Отмытами 8 разаВ среде 199 20(6) 1(5) 2 Экстракты рака желудка 5(2) 21 Экстракты слизистой желудка, прилежащей к опухоли П р и и е ч а н и е. В скобках - дополчительные случаи выявления сенсибилизации. Формула изобретения 1 О Корректор А. Камыш ни кова Корректор О. Гусева Редактор 3. Ходакова Подписное Тираж 673 Изд.34 Заказ 279712 Типография, пр. Сапунова, 2 ми лейкоцитами ставят реакцию подавления миграции лейкоцитов, используя в качестве антигенов экстракты опухолей и нормальных тканей. Оставшиеся порции лейкоцитов, взвешенных только в среде 199 и такой же среде, но с добавлением 10% аутологичной плазмы, инкубируют прн 4 С 12 ч. После этого надосадочную жидкость сливают, лейкоциты отмывают один раз средой 199, центрифугируя их в ней прн 500 об/мин, и разводят до исходной концентрации. С полученными лейкоцитами тоже ставят реакцию подавления миграции лейкоцитов, добавляя к ним антнгены опухолей или нормальных тканей.Влияние преинкубации лейкоцитов больных раком желудка при 4 С 12 ч на подавление их миграции в реакции подавления миграции лейкоцитов антигенами опухолей показано в табл. 2.Лейкоциты ряда больных, не реагировавшие на антигены в реакции подавления миграции лейкоцитов, приобретают эту способность после преинкубации прн 4 С 12 ч в среде без сыворотки. Предлагаемый способ обеспечивает высокую чувствительность определения, что позволяет расширить диагностические возможности (особенно в онкологии) реакции 5 лизиса или лейкоцитолиза лейкоцитов, реакции подавления миграции лейкоцитов, реакции бласттрансформации лимфоцитов,Способ определения сенсибилнзацни лейкоцитов к антигенам путем выделения лейкоцитов с последующим их отмыванием,15 обработкой антигеном, инкубированием иоценкой полученных результатов, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышениячувствительности определения, лейкоцитыперед обработкой антигеном преинкубиру 20 ют при 4+ 2,0 С в течение 12+ б,0 ч в бессывороточной физиологической среде.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. К. Лабораторное дело, 1977, Ъо б,25 с. 343 - 34 б.