Способ обнаружения микрокапсульных микроорганизмов

(54) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ МИКРОКАПСУЛЬНЫХ М И КРОО РГАН ИЗМОВИзобретение относится к области микробиологии.Известен способ обнаруж апсульных микроорганизмов п копирования исследуемого 1. Способ позволяет выявитььные формы микроорганиз и- тельном их содержании в и атериале.Однако известный способ не обеспечивает 1 высокой точности,Целью изобретения является повышение точности способа.Эта цель достигается тем, что исследуемый материал предварительно смешивают 1 и инкубируют со взвесью лейкоцитов в плазме свежевзятой крови восприимчивого к данной инфекции организма из расчета 5 - 30 микробных клеток на 1 лейкоцит.Способ осуществляют следующим обра зом. ения микрок утем микрос материала микрокапсул мов при знач сследуемом м робирку с мешивают мпературе н), Затем 25 содержалазме кропосле усу мутностисмешива Кровь от донора берут в п внесенным в нее гепарином, пере и выдерживают при комнатной те до оседания эритроцитов (20 ми отбирают верхнюю часть пробы щую лейкоциты, взвешенные в п ви. Суспензию живых микробов тановления их числа по стандарт или каким-либо другим приемом ют со взвесью лейкоцитов в плазме крови таким образом, чтобы отношение микробов и лейкоцитов в реакционной системе составляло 5 - 30 микроорганизмов на 1 лейкоцит. Полученной реакционной системой заполняют камеры гемоцитометров (Горяева, Бюркера, Тома или другие) и содержимое каждой камеры герметизируют по периметру покровного стекла расплавленным парафином. Приготовленные таким образом камеры с реакционной системой инкубируют в течение 1 - 5 ч. Через определенные промежутки времени, которые зависят от вида и величины внесенной дозы микроорганизмов, покровные стекла с отпечатанными на них препаратами снимают с камеры, высушивают, фиксируют, окрашивают общеупотребительными приемами и подвергают микроскопированию. В результате взаимодействия лейкоцитов и микробов, которым свойственно образование микрокапсулы, в отпечатанных на покровных стеклах препаратах четко выявляются бескапсульные формы микробов, фагоцитированные и перевариваемые лейкоцитами, и микрокапсульные формы микроорганизмов, расположенные вне лейкоцитов.П р и м е р 1. 0,1 мл двухчасовой культуры возбудителя брюшного типа, штамм ТУ,-4446, выращенной на агаре Мартена676611 Формула изобретения 35 40 45 Составитель С. Малютина Техред А. Камышникова Корректор Л. Брахнина Редактор М. Дмитриева Заказ 1684/3 Изд.476 Тираж 549 ПодписноеНПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 при 37 С и смытой с поверхности агара бульоном Мартена, вносят в 0,4 мл свеже- приготовленной взвеси лейкоцитов в плазме крови здорового человека, взятой за 0,5 ч до внесения микроорганизмов, Отношение возбудителей брюшного тифа и лейкоцитов составляет 11: 1, Полученную таким образом реакционную систему вносят в 7 камер Горяева, герметизируют расплавленным парафином и инкубируют при 37 С в течение 4 ч, снимая покровные стекла для анализа с интервалом в 0,5 ч. Фиксируют отпечатанные на покровных стеклах препараты, окрашивают их азур-эозином по Романовскому-Гимза и микроскопируют,Обнаружено, что после 3 ч инкубирования (в препарате из 5 камеры) большая часть бактерий поглощена лейкоцитами, а из микробов, оставшихся нефагоцитированными, 70 имеют микрокапсулу, окрашенную в розовый цвет,П р и м е р 2. 0,1 мл взвеси живых менингококков штамма Ав бульоне Хоттингера, полученных из двухчасовой культуры возбудителя, выращенной на сывороточном агаре Хоттингера, вносят в 0,6 мл взвеси лейкоцитов в плазме крови человека, полученной так, как это указано в примере 1. Отношение менингококков и лейкоцитов составляет 25: 1, После перемешивания реакционную систему вносят в 5 камер Горяева, герметизируют расплавленным парафином и инкубируют при 37 С в течение 3 ч, снимая покровные стекла с интервалом в 0,5 ч, фиксируют отпечатанные на покровных стеклах препараты, окрашивают их азур-эозином по Романовскому-Гимза и микроскопируют.Найдено, что после 2 ч инкубации (в препарате из 3 камеры) подавляющее число менингококков поглощено лейкоцитами, а из нефагоцитированных диплококков около 80% имеют микрокапсулы.П р и м е р 3. 0,2 мл культуры золотистого стафилококка, выделенного от больного стафилококковым эндофтальмитом и прошедшего 3 пересева, после выращивания на агаре Хоттингера в течение 18 ч и смыва бульоном Хоттингер а с 2 о/, глюкозы, вносят 5 10 15 20 25 30 4в 0,6 мл свежеприготовленной взвеси лейкоцитов в плазме крови кролика, не имеющего антител к стафилококку. Кровь от кролика берут за 0,5 ч до составления реакционной системы, Отношение стафилококков к лейкоцитам составляет 27: 1. Полученную таким образом реакционную систему вносят в 7 камер Горяева, герметизируют расплавленным парафином и инкубируют при 37 С в течение 4 ч, снимая по- кровные стекла с интервалом в 0,5 ч. Фиксируют отпечатанные на покровных стеклах препараты, окрашивают их азур-эозином по Романовскому-Гимза и микроскопируют.Обнаружено, что через 2,5 ч после начала инкубации реакционной системы (в препарате из 4 камеры) около 90 стафилококков, находящихся вне лейкоцитов, имеют нежно-розовую микрокапсулу.Предлагаемый способ позволяет надежно обнаруживать микрокапсульные формы микроорганизмов - возбудителей инфекций, в том числе при первичном обнаружении сравнивать по признаку образования микрокапсул различные штаммы одного и того же микроорганизма, проводить исследования по обнаружению микрокапсул в любой баклаборатории, поскольку способ является простым в исполнейии и не требует применения сложной аппаратуры (электронного микроскопа). Способ обнаружения микрокапсульных микроорганизмов путем микроскопирования исследуемого материала, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, исследуемый материал предварительно смешивают и инкубируют со взвесью лейкоцитов в плазме свежевзятой крови восприимчивого к данной инфекции организма из расчета 5 - 30 микробных клеток на 1 лейкоцит.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1, Езенчук Ю. В. Биомолекулярные основы патогенности бактерий. М. Наука,1977.