Способ биосинтеза микробного инсектицида

ОП ИСАНИ ЕИЗОБРЕТЕН ИЯК ПАЗЕНСУ Сефв СфветсиикСфцлаллстмчесинкРаслублли 61) Дополнительный к патент 22) Заявлено 20,05,76 (21) 2 51) М, Кл 362353/30(23) Приорите(ЗЛ)Опублико 32) Государственный комитет СССР но делам изобретений н открытий01 и 15 53) УДК 63293 , 15 (0888) Бюллетень я 19исания 250179 аио 2 Ь 0579.ликования о ата оп Иностранц Замала Бранимир2) Авторы изобретеии Кайфес франйо остранная фирмаания ди Ричерна Хими(71) Заявитель фКРК Ком А,СПОСОБ БИОСИНТЕЗА МИКРОБНОГО ИНСЕКтИЦ 3Изобретение относится к получению микробиологических средстВ защиты растений на основе Вас)Ииз Йигтп 91 Ещщ.Известно использование укаэанных микроорганизмов для получения инсектицидов. Изучено образование токоинов и кристаллов и их биояогическое дей;ствие1) и 2 .Недостатком известных способоВ йолучения инсектицидов на основе БасЖиа Фопфепз 1 а является отсутствие строгого контроля процесса ферментации и связанная с этим высокая токсичность готового препарата. н й способ обеспечивает р и кристаллов Вас.Отигесодержащих экзотоксин, и дотвратить ранний ливис ток. При реализации спобактерий для инокуляции чалочных колбах на сре(вес,): с датй т и, рН жениемается Предлагаемыполучение спофепйэ, непьэволяет премикробных клесоба культуруполучают в каде, содержащеБакто-трип(фДифкоГлюкозаМ 9 ЯО ф 7 НОЙпЯ 04 7 НтОРе (ЯО 4 )зМпЯО 4 5 Н 2 О Среда для культивирования на косяках имеет тот же состав, что и описанный выше, йо с добавлением 2 агара.Хорошие результаты-получают при ферментации на, следующих средах.Среда 1. Меласса (50 тверцого вещества) 1,41 дрожжи 0,31 (ИНе) ЯОл 0,1; С.Я.Ь.(жидкость от замоченной) кукурузы) 0,1; СаСО 3 0,1, Величи на рН после стерилизации 6,8,Среда 2. Крахмал 1,3; дрожжи 1,0 т КНаНРОЛ 0,4;. С,Я.Ь. 0,2 у СаСОа 6,81 величина рН после стерилизации 6,8,Культивирование проводят в фермтерах из нержавеющей стали прн пермещивании 150 об/мин, а аэрацию 0;5 л/л/мин. Оптимальная температукультивирования 28-30 фС. Для предовращения раннего лизиса клеток на12-ом часу роста прекращают аэрацна 3-6 час, Культивирование можнопроводить и беэ прекращения аэрацесли строго регулировать величинуи .поддерживать ее на уровне не ни6, 3 .Образование спор с ос вобождекристаллов э ндотокси на з ак анчивчерез 3 5 - 4 0 ч ас .664531 формула йзобретения Составитель М, Мирзаев Редакто , пинч к техрещ Н. Андрейчук корректор с. патрушеваЗаказ 2824/55 Тираж 754 Подписное.ЦНИИПИ ГосударствеНного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035 Москва ЖРа скак ааб. . 4 5 Филиал ППП 3 Патент , г. Ужгород, ул, Проектная, 4 После полного выхода .спор и эндотоксина проводят отпеление от 6 ихзкзотоксина. Водорастворимый экзоток"син удалявт диализом через полупроницаемую пленку,освобожденный от экзотоксина процукт высушивают известными способамиг,5во вращающейся или пневматической сушилке, путем перемешивания спор икристаллов с бентонитными глинами и-введения в сушилку с пластинкамипри 40-45 С или распылительным.способом.после сушки на пластинчатых установках препарат измельчают в устройст-ве типа.Альпина и просеивают черезсито с ячейками 9 180. 15Активность препарата определяют.путем вычисления живых спор и при помощи подопытных насекомых.П р и м е р 1. Культуру 43 асЛИ 3 г 433 фвеггчь щи. где бпег культивируют на сре 520де 1 при 28 С,перемешивании 150 об/мини скорости аэрации 0,5 л/л/мин. Через12-14 час после начала ферментациипрекращают азрацию на 3-6 час. Время" прекращенияаэрации определяютспомощью кислородного анализатора и аэра-цию прекращают как только уменьшит-ся процесс растворимости и расходакислорода и рН понизится до 5,8. Через 3-6 час аэрацию возобновляютферментацию продолжают до тех пор,пока споры и кристаллы не выделяютсяв среду (35-40 час, ). Далее среду загружают в сборник и очищают от экзотоксина диализом. КультураЬьная жирность переливается в сборник А,.снабженный смесителем с диализной мембра"ной. Мембрана, может быть коллоидаль ной или .иметь другой вид. Диализ ускоряется, если в сборйик В прибавляютдеионизированную воду. К полученной 40смеси спор и кристаллов добавляют порошкообраэный наполнитель и высушивают на"пластийках в сушильной печи,Да""леепродукт размалывают, размельчают:.в устройстве типа Альпийа и просеива" 45ют, получая порошок.П р и м е р 4 2. Способ проводят,как в примере 1, однако 4 для фермента-,-:ции используют среду 2.П р и м е р 3. Способ осуществляют, как в примере 1, однако, после ферментации и диализа полученный продукт сушат в центробежной сушилке и размалывают в устройстве типа Альпина.П р и м е р 4. Способ проводят, как в примере 1, однако, после ферментации и диалйза продукт опять суспендируют в воде и эту суспензию распыяительно сушат при 90"100 С. Для этой цели используют распылительные сушилки, имеющие диски, вращающиеся со скоростью 10-15 тыс. об/мин.Преимущества предлагаемого способа состоят в том, что он позволяет получать. препарат с повышенной активностью при высоком содержании спор и эндотоксина, но без,с 3 -экэотоксина. 1. Способ биосинтеза микробного ин- сектицидаР включающий культивирование ЬасбЮца Ио 31 пфеггМз в глубинных условиях, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью предотвращения раннего лизйса клеток бактерий, ферментацию временно проводят в анаэробных Условиях, а препарат очищают от экзотоксина дижизом.2. Способ по п1, отличающ и й с я тем, что ферментацию в анаэробыых условиях проводят прекра щением аэрации на 4-6 час после 12 час с начала ферментации.3. Способ по пп 1 и 2, о т л ич а ю щ и й с я тем, что ферментацию бактерий до окончания образования.спор проводят при рН 6,3-7. 4. Способ;по пп. 1, 2 и 3, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что инсекти- . цид очищайт от аводорастворимого экзотоксина путем диализа через еголупро- ницаемую мембрану.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе г. бе Ьеьа К, ег.аЮ 1 г 33 и Ь 3,5 оРг ог ае иочо11 К 34 буЫИемз 439 Ые 1 Ргеесй 5 сбаа 6 елойок 3 оо 1 оас. Ог 533 133 дегьфв 34 а 3, аЫе 3 5 ае . СоИее-.Ыю С 3 езЛоби 34 Сг 3 еп, Со пгао, Й.,З 41969, р. 1786-1791.2, Авторское свидетельство СССРР 144579, кл. А 01 В 15/00, 1961.