Способ получения м-крезотиновой кислоты

(72) Авторы изобретен и Э, М.Абд М. Ис микробиологии АН Азербайджанской ССР 71) Заявнтм СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ М-КРЕЗОТИНОВОЙ КИСЛОТЫ обиологинно к спо- ( 4-метилуемой венностях ивного веИзвестен способ получения м-крезотиновой кислоты окислением 2-метил- нафталина при помощи микроорганизмов;. ф в жидкой среде с последующим выделением целевого продукта 11,Однако такой способ не позволяет получать м-крезотиновую кислоту с боль 1 шим выходом. Процесс осуществляется культурой бактерий, растущей на 2-мета- нафталине. Концентрация 2-метилнафталина в среде высокая и составляет 5 г/л. Выход м-крезотиновой кислоты очень низкий и достигает 0,065 г/л, что составляет 1,3% от заданного субстрата.Процесс осуществляется,в среде с использованием большого количества миН О Изобретение относится к еской промышленности, а имсобу получения м-крезотиново салициловой) кислоты, исполь пишевой и химической промыш в качестве физиологически акт шества. неральных солей и 0,1% дрожжевогоакстракта.Целью изобретения является повышение выхода м-крезотиновой (4-метилсалициловой) кислоты.Это достигается тем,что иэ микроорганизмов, окисляюших 2-метилнафтал ин, испол ьэуют штаммы СйлЖба . вйейа ЫдеаВКМУили СапФда фиГЮЕлщолдмВКМУ16,Сущность способа завтючается,в том,что использование штаммов Ълс 6 да Фе 8 Ъ 1 одеа ВКМУСопдтда фибеюолб 11 ВКМУпозволяет осуществлятьь оксигеназную реакцию окисления с расщеплением неэамешенного бенэольного кольца 2-метилнафталина с образованием и накоплением в реакционнойсреде практически чистой м-крезотиновойкислоты по схеме:663717 3 2-метил нафтал ин ЦНИИПИ Заказ 2922/21 Тираж 525 Подписное филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 м-креэотиновая ( 4-метилсалициловая)кис лотаПроцесс осуществляют отмытымиклетками дрожжей СесИООвыращенными на сусло-агаре в среде с фосфатным буфером при низкой исходной концентрации 2-метил нафтал ина - О 0 940,1% (0,94-1,0 г/л) при выходе продукта трансформации - м-крезотиновойкислоты в среднем до 26-32,0%.Направленную трансформацию 2-метилнафталина в м-крезотиновую кислотуосуществляют с помошью штамма СаосбдсМИХаби 4 ео ВКМУи СалддцДсИепюпс 6 т ВКМУ, которыехранятся во Всесоюзйой коллекции микроорганизмов (г. Москва), а также вСекторе микробиологии АН Азербайджанс-кой ССР. Культуры поддерживаются на20сусло-агаре,П р и м е р 1, Суспензию клетокбпсМда вЫЬЬидеа ВКМУ выращивают на сусло-агаре, двухсуточ 25ную культуру смьвают с поверхностисусло-агара, дважды промывают фосфат-ным буфером, рН 5,4-5,6, Суспенэиюотмытых клеток инокулируют в колбахЭрленмейера в реакционную среду, состоящую из К- Нс 1 -фосфатного буфера,30(рН 5,4) и 0,1% 2-метилнафталиноа. Колбы инкубируют на качалке при 30 С и200 об/мин. Изменение концентрациим-крезотиновой кислоты наблюдают спомощью хроматографии, К 100-1 10 часув среде накапливается максимальное количество м-креэотиновой кислоты.М-крезотиновую кислоту выделяют изподкисленной до рН 2,0 реакционной среЮОды экстракцией серным эфиром после отделения клеток центрифугированием, Изэфирного экстракта целевой продукт вы-,деляют обработкой 5%-ным водным раствором бикарбоната натрия в делительной45воронке, Водный слой бикарбоната послеотслаивания отделяют от эфирного, подкисляют до рН 2,0 растворомсернойкислоты. Из подкисленного раствора мкрезотиновую кислоту экстрагируют сер 50ным эфиром. После отделения от воднойфазы эфйр высушивают над хлористымкальцием и перегоняют на роторном испарителе, В остатке выделяют практически чистую м-креозотиновую кислоту с выходом до 0,25-0,3 г/л или 26,5- 32% от заданного субстрата.Препаративно выделенное вещество ,имеет Й -0,85 при хроматографировании на пластинках Ыи 1 оГв системе бензол-диоксан-уксусная кислота 90:25;4 Вещество представляет собой кристаллы. Уф-а ИК-спектры идентичны спектрам м-крезотиновой кислоты.П р и м е р 2 Суспензию выросшей на сусло-агаре культуры Сспд 1 сс ДО 1- бегРойсИ 1 ВКМУзасевают в колбы на 750 мл с 50 мл фосфатного буфера рН 5,4 и добавляют 0,05 г 2-метилнафталина. Колбы инкубирутот на качалке, К 72 часу культуральную жидкость центрифугируют и анализируют .аналогично примеру 1, Выход м-крезотиновой кислоты 0,27-О,30 г/л (28-32% заданного субстрата).Использование пре длагаемого способа позволяет увеличить выход м-крезотиновой кислоты до 26,5-32% (по сравнению с выходом 1,3% при известном способе.Процесс ферментации ведется в средесодержащей в 5 раэ меньшую концентрацию трансформируемого субстрата. Он также ведется в простой буферной среде, что экономит значительное колйчество разнообразных минеральных солей. формула изобретения Способ получения м-крезотнновой кислоты окислением 2-метнлнафталина при помощи микроорганизмов в жидкой среде с последующим выделение целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что с целью повышения выхода, кислоты, из микроорганизмов окисляющих 2-метилнафталин, используют штаммы Ъпсйда Ыесс 1 сидео ВКМУилн Сацкйбо фиГбе глопбйВКМУ16. Источники информация, принятые вовниманиеи при экспертизе 1, 6. ЬДаптт, Т,ОттОгчУ. МюодО, К. Хопюдо,Зй,Ь 4 оГ . Сажею . 1974, 28,2, с. 401-408.