Реактив для определения холестерина

О П И С А Н И Е ибгг 4 г 4ИЗОБРЕТЕНИЯК ПАУЕН 1 У Сфвз Сфаетсинк Сфцнаинстнчвскни Реснублнк/28-13С( 01 М 33/16 (23) ПриоритЕт 1705.7 а 32) 17.05.72 Государственный комитетСоаета Министров СССРпо делам изобретенийи открытий(45) Дата опубликования описания 1007,78 ИностранцыВольфганг Грубер, Ханс Ульрих Бергмайер, Эрих Бернт,(72) Авторы изобретения Иностранная фирмафБерингер Маннхайм ГмбХф (ФРГ)(54) РЕАКТИВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХОЛЕСТЕРИНА Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для диагностики различных заболеваний.Известен реактив для определения холестирина в общей фракции липидов, содержащий буферно-солевую среду и поверхностно-акти.ное вещество Я .Однако известный реактив не обеспечивает высокой специфичности и чувствительности анализа в отношении холестерина.Цель изобретения - повышение специфичности и чувствительности анали- за.5 Эта цель достигается тем, что предлагаемый реактив дополнительно содер-жит.холестериноксидаэу, 2,4-динитрофенилгидразин и холестеринэстеразу при следУющем соотношении компонен.тов, вес.%:Холестериноксидаза 0,025-1,5002,4-Динитрофенилгидразин 1,000-5,000.Холестеринэстераза 0,025-1,500Поверхностно-активное вещество 0,040-8,000Буферно-солеваясреда Остальное. Реактив пригоден для определения холестерина в таких водных средах, как экстракты продуктов питания,жидкости, содержащиеся в теле и сывороткиБлагодаря большой специфичности при помощи нового реактива может быть произведено определение только свободного холестерина. Однако связанный холестерин, который, как известно, находится в этерифицированной форме, может быть определен после предварительного химического или ферментативного омыления. Химическое омыление производят, например, спиртовым раствором гидроокиси калия, а ферментативное омыление - экстераэой, преимущественно холестеринэстеразой полученной из печени или поджелудочной железы.П р и м е р. Определение холестенона.Берут 02 мл сыворотки, разбавленной водой в соотношении 1:10, смешивают с 0,05 мл 20-ного раствора гидроксиполиэтоксидодекана и 0,15 Ч холестериноксидазы. Спустя 15 мин прибавляют 2 мл раствора, содержащего 1 М 2,4-динитрофенилгидразин в 1 н.соляной кислоте, через 30 мин прибавляют 4 мл воды ( в количестве образо-,Заказ. 4729 Тираж 1,112 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филкал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 вавшегося гкдразона) и замеряют вфотометре вобласти 405 нм. Оценкупроизводят по стандартной кривой,принимая во внимание значение, получен.ное в контрольном опыте. Измерение.также.можно .проводить в области 546 нмпосле добавления щелочи. Измерение, проведенное на типичной пробе показало) 60 мгЪ свободного холестерина к 154 мг В общего холесте рина (омыление спиртовым раствором гидроокиСк калия),Проведенное для сравнения определение по Лиеберману и,Бурхарду дало . результат 170 мг % общего холестери наеДля омыления этерифицированного холестерина (определение общего холестерина в сыворотке) смешиваЮт 1 мг сыворотки, 1 мл 20-ного раствора 20 гидроксиполиэтоксидодекана и 5 мл 0,5 М раствора гидроокиси калия в 90-ном этиловом спирте, смесь нагревают 30 мин при 70 С, затем раствору дают возможность охладиться, смешивают его с 10 мл 0,1 М раствора серно" кислого магния и центрифугируют. Раствор над осадком (13 мп) содержит общий холестерин в свободной форме.Дпя омыления этерифицированного холестерина с использованием эстеразы печени - холестеринэстераэы сйворотку выдерживают 30 мин при 37 С и рН от 6 до 8.Предлагаемый реактив для определе- ния холестерина специфичен и высоко- чувствителен к может найти широкое применение в медицине для диагностк ческих целей, так как повышенное содержание холестерина в крови является важным показателем возникновении артериосклероза, а при высоком содержании холестерина,. т.е. при гиперхолестеркнемии, коронарная недостаточность к инфаркты сердца наблюдаются чаще, чем прк низком содержании холе стерина. Гиперхолестеринемия благоприятствует возникновению артериосклероза и коронарной болезни,Повышенное содержание холестерина также наблюдается при сахарном диабе" те, невротическом синдроме, гипотиреозе и прк болезнях печени, например, при бина.ком циррозе.Благодаря предлагаемому реактиву анализы могут быть проведены быстро и дать достоверные результаты, что имеет большое значение для лечения. Реактив для определения холестерина в общей фракции липидов, содержащий буферно-солевую среду и поверхностно-активное вещество, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения специфичности и чувствитель ности анализа, реактив дополнительно содержит холестеринокскдазу, 2,4-ди. нитрофенилгидразин и холестеркнэсте" разу при следующем соотношении компонентов, вес.В:Холестеринокскдаза 0,025-1,500 2,4-ДинитрофенилгидразинХолестеркнэстеразаПоверхностно-активное вещество -0,040-8,000 Буферно-солеваясреда Остальное.