Способ получения нуклеозид-5″-дифосфатов

Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявлено 14.05.74 (21) 2027851/О м заявкис присоедине Гасударственный комитет Совета Министров СССР ао делам изобретений и открытий(72) Авторы изобретения овосибирский институт органической химии Сибирского от АН СССР и Специальное конструкторско-технопогическ бюро биопогических активных веществ ения(71) Заявители 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОЗИД-ДИФОСФАТОВ Изобретение относится к усовершенствованию способа попучения соединений, которые применяют в биохимии при исследовании синтеза нуклеиновых киспот и при и попьзовании ферментативных систем.Известен способ попучения нуклеозид- -дифосфатов путем превращения нукпеизид- монофосфатов в более реакционно-способ 4 В"ные нукпеозид-фосфоморфопиды обработки их трибутипаммониевой сопью ортофосфор-Оной кислоты в диметипсупьфоксиде и последующей очистки целевого продукта хроматографией на анионообменных смопах. Нукпеозид-фосфоморфопиды получают при температуре 80-90 С в течение 4 час взаимо- бдействием нукпеозид-монофосфатов и морфолина в среде дицикпогексипкарбодиимида,воды и трет.-бутипового спирта.К основным недостаткам известногоспособа относится проведение процесса попу-Отчения нукпеозид-фосфоморфопидов при теьопературе 80-90 С, а также испопьзованиена этой стадии в качестве конденсирующегоагента дорогостоящего дицикпогексипкарбодиимида, обпадающего сильно выраженными 25 аппергенными свойствами. и вспедствие етого требующего применения специальных средств зашиты.Дпя упрощения процесса предлагается способ, по которому в реакцию с морфопином вводят активное мсномерное производноенукпеозид-монофосфата. Его попучают путем взаимодействия аципированного нуклеозид-монофосфата с и-толуолсульфохлоридом в смеси пиридина и ацетонитрипа при комнатной температуре. Добавление к реакционной смеси 10-кратного избытка морфопина приводит к копичественному образованию нукпеозид-фосфоморфопида, ПоспедуюIщее получение нукпеозид-дифосфата проводят известным способом.П р и м е р. Синтез уридин-диофосфата1 г 3-2-0-диацетилуридин-фосфата и 1,140 г и -толуолсульфохлорида выдерживают в течение 45 мин при комнатной температуре в 12 мп смеси; ацетонитрип и пиридин (2;1), поспе чего добавляют к 3, 1 мп морфопина. Из реакционной смеси отбирают апиквоту, обрабатывают концент рированным аммиаком в течение 1 часа558924 Составитепь В. ЖестковРедактор Н. Яаиипович гехред А. демьянова Корректор П, Макаревич Заказ 1615/83 Тираж 553 Подписное ЦНИИПИ Государственнного комитета Совета Министров СССР пв делам изобретений и открытий 113035, МФосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патент, г. Ужгород, уп. Проектная, 4 и хроматографируют на бумаге в системе этанопМ.ацетат аммония (5:2). Результаты анапиза показывают количественное образование уридин-Йфосфоморфопида. Затем реакционную смесь упаривают до попучения масла нв ротационном испарителе.уцариваютс бензолом (ЗхЗОмл) для удаления следов пиридина добавляют 10 ммопей трибутипаммониевой сопи ортофосфорной кислоты в диметипсуьфоксиде. Реакционную смесьо :термостатируют в течение 18 час при 37 С, затем высаживают в 200 мп смеси; ацетон- концентрированный аммиак (100:1). Выпавший осадок фипьтруют, промывают ацетоном (Зх 50 мп), растворяют в 20 мп З,М аммиак ка, через час аммиак удапяют упариванием на ротационном испаритепе; продукт растворяют в 20 мп воды и хроматографируют на копонке с анионообменной смопой ДЭАЭ- мопсепектом (100 мп) в пинейном градиен те концентраций бикарбоната аммония (О,5 М). Объем эппюата 800 мп, скорость епюции 100 мп/час. фракции основного пика объединяют, концентрируют и удапяют бикарбонат аммония упариванием водой 25(Зх 50 мп). Попученный маспообразный осадок растворяют в 5 мп воды и высаживаютв ацетон (100 мп). Замаслившийся осадокпромывают ацетоном, затем растирают вспирте до попучения осадка. Осадок сушатв вакууме над Р 05. Анапиз проводятметодом хроматографии на бумаге в системе изомаспяная киспота - концентрированный аммиак - вода (66:1;33), Продуктхроматографически однородный, выход 80%,содержание нукпеотидного материала 80-90%. ф ормупа изобре тения Способ попучения нукпеозид-дифосатов, включающий попучение нукпеозид- -фосфоморфолидов с обработкой последних трибутипаммониевой солью ортофосфорной киспоты в диметипсупьфоксиде с последую. щим выдепением целевого продукта, о тпичающийся. тем,что,сцепью упрощения процесса, нукпеозид-фосфоморфопид получают последовательной обработкой аципированного нукпеозид-фосфа/ та и -толуолсульфохлоридоми морфопином.