Штамм метилотрофных бактерий -продуцент формиатдегидрогеназы

р ВЬ Р О П И С А Н И-Е ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(23) Приоритет Гасударственный камитет Сааета Министрав СССР па делам изааретений и открытий(72) Авторы изобретен оненковв Карзанов 71) Заявител Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государств университет им, М. В. Ломоносова 4) ШТАММ МЕТИЛОТРОФНЫХ БАКТЕРИЙ Вас 1 епцгп вресев Хо 1 ПРОДУЦЕНТ фОРМИАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ 2 Изобретение относ му производству ферм эованием в качестве может быть применен логической и пищевой Известны штаммы ц тусгосусцз ро 1 ц мового белка, растущ метанолом 11,Недостатком этихПредложенный штамм хранится в коллекции метилотрофов кафедры м;икробиологии Биологи ческого факультета МГУ под номером 101. Штамм выделен из сточных вод, содержащих метанол.Штамм бактерий Вас 1 вгцт врвс 1 вв 9 101 имеет следующие морфологическую и физиологическую характеристики. тся к микробиологическо. нтных препаратов с нспольырья метилового спирта и в медицинской, микробно. ромышленности.Рвецдогпопгв ггвйуотгорЬа пюгрпцтп-процуценты кор ие на минеральной среде с блестяухсуточнх 0,5.0,7спор на штаммов является низкий 10ментов, не позволяющийтсокозффективные продуцен.активных веществ,ровень синтез использовать их какты этих биологически аэробы.ДНК 69,4 естящий естен штамм Рвецботопав охаатсцв, 1 бтет на среде с формиатом и промиатдегицрогеназу2 1,ом штамма является необходимостьего на сравнительно дорогом субстра.натрия, незначительное накопление биотельно низкая активность фермента.бретения является штамм бактерий,питательной среде с метанолом иысокой удельной активностью и вы.тдегидрогеназы. 25 Также иэт орый ра олоко н ливаютчивы, Ме ние к угле дам. Усваивает глюкозу,озу, рибоэу, Не усваивает озу, арабинозу,м, Усваивает метиловый,обутиловый спирты, глиОтнош фруктоэу, галактозу,Отнош сахарозу, ксил рафиноэу, рамн ение к спирта пропиловый, и этиловыи дуцирует фор Недостатк выращивания те - формиате массы и сравни Целью иэо растущий на обладающий в ходом формиаКолонии мелкие, белые,Средняя величина клеток двна среде с метанолом 1,0-15кие неподвижные палочки,менты не образуют, строгиетельные содержание ГЦ вкартофеле и на сусло-агаре блЖелатину не разжижают. мруют, ннтраты не восстанавсбраживают. Некислотоустойусваивают. щие, гладкие,ой культурымкм. Коротимеют, пигГрамотрицамоль %. Нвбелый налет.е пептонизи.глюкозу непамины не543672 20 Тираж 78 цНИИПИ Заказ 612 Й 5 З Подписное фнднан ППП" Патвнт ", г, Ужгород, ул, Проектная, 4 церин, маннит, сорбит. Не усваивает изопропиловый, бутиловый спирты, дульцит, инозит.Отношение к органическим кислотам. Усваивает ацетат, бутират, пируват, лактат, аксалоацетат,П р и м е р. Культуру метилотрофных бактерийВастегап зресез У 101 выращивают в полупроизводственных условиях в 100 л ферментерах на минеральной среде следующего состава в г/л): КН, Р 04.2,0; (ЙН 4)804 - 2,0; МаС 1-0,5; М 9 ЯО,ф 7 Н, О 0,025; Ре 80-0,01, вода дистиллированная. рН средыпосле стерилизации 7,2. Во время посева вносят 1 %метанола и 0,2 мл 10%. ного раствора дрожжевого ав.толизата на 1 л среды. Посевной материал вносят вколичестве 2-3%. Режим ферментации: температура28 С, расход воздуха 1:1, избыточное давление 0,5 атмастерилизация 120 С в течение 2 час паракультурувыращивают 45 52 час, Выход биомассы 250.300 гсырьх клеток с ферментера, т.е. 500-700 мг сухихклеток на 1 л среды,Очищенный на 95% препарат формиатдегидрогеназы из клеток штамма Вастепит Бресев 9101выделяют следующим образом,Клетки собирают центрифутированием при6000 об/мин в течение 30 мин, суспендируют в 0,1 Мфосфатном буфере при рН 7,5; разрушают при 22 кГцв течение 15 мин и вновь центрифугируют при 20000 фв течение 30 мин. Супернатант обрабатывают сульфатом аммония (40% от насыщения). Осадок от.брасывают, а супернатант вновь обрабатывают суль.фатом аммония (60% от насыщения. Через 36 часцентрифугируют, осадок растворяют в О,ОЗМ фос.фатном буфере с рН 7,8 и диализуют против того жебуфера, Полученный препарат наносят на колонку сДЭАЭ - целлюлозой, Колонку промывают О,ОЗМфосфатным буфером, рН 7,8 фермент элюируют0,1 М раствором ИаС,Получают препарат, который на 95% состоит изформиатдегидрогеназы, Выход фермента по актив.ности составляет 30% при 20 кратной очистке. гликолат. Не усваивает пропионат, кетоглутарат,сукцинат, фумарат, малат, цитрат, тартат, бензонат.В таблице приведены значения активности фор.миатдегидрогеназы у различных шгаммов. Формула изобретения Штамм метилотрофных бактерий Вастепцвзресеа У 101 - продуцент формиатдегидрогеназы, Хранится в коллекции кафедры микробиологии МГУ.25 Морфологические признаки. Колонии мелкие,белые, блестящие, гладкие. Величина клеток двух.суточной культуры на синтетической среде с метанолом 1,0 1,5 х 0,5.0,7 мкм. Неподвижные палочки, грамотрицательные, спор не образуют.з 0 Физиологические признаки, Строгий аэроб. Пигмент не образует, Желатину не разжижает, молоко не пептонизирует, Нитраты не восстанавливает, глю.козу не сбраживает. Растет на сусло.агаре. Не растет на бульоне и на мясо.пептонном агаре. Некислотоз 1 устойчив, Не использует метиламиньь Отношение к углеводам. Усваивает глюкозу,фруктозу, сахарозу,ксилозу, рибозу.Отношение к спиртам. Усваивает метиловый,40 зтиловый, пропиловый, изобутиловый спирты, глицерин, маннит, сорбит.Отношение к органическим кислотам. Усваива.ет ацетат, бутират, пируват, лактат, акселоацетат,гликолат.4 Б Источники информации, принятые во вниманиепри экспертизе:1. Патент Великобритании У 1370892, кл, С 6 Р,от 16,10.1974,2, 7 оИ пьои, Голее- МогМпмг а СиОуВе,(964 Обе ригЮед ЬасСегсаР Уоггпа 1 еОеЬудгоеыбе Гог Юе гтисгос 84 щайолот Уоглйбе, 84 осИгп е Ворйуе, ясВа.Ч 89,йф 2 р 35 (щототнп),