Способ получения поливалентной агглютинирующей о-сыворотки для идентификации нехолерных вибрионов

(11) 512767 содсоюаО П И С А Н И Е циалистических Республик ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(22) Заявлено 08,05,73(2с присоединением заявки 1934655128-1 осударственный квинтеСеввтв Мнннстрав СССРво делам изобретенийн еткрытий(088.8) писания 14,05.764 Дата опубликован 72) Авторы изобретени А. К. Адамов и И. И. Шуркина,(71) Заявител 5 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОИ АГГЛЮТИНИРУЮ 0-СЫВОРОТКИ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ НЕХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ,1:800, сыворотки серотипов 2,11,14,15,21,23,28,40-1;1600 и сыворотки серотипов 3,4,5,7,8,9,10,12,13,16,20,22,26,29,31,33,35,36,37,38,39,-1:3200.Для приготовления поливалентной вибриной агглютинирующей 0-сыворотки использу.ют агглютинирующие 0-сыворотки против 3серотипов патогенных вибрионов (группыСаказаки).нов осушест кробиологии едицине для Изобретение относится к мии может быть использовано в м1 диагностики холеры,Известен способ получения поливО-сывороток, например, против разлпредставителей семейства Етйатооаспутем иммунизации кроликов однойвых культур, прогретой в течениепри 100 оС, с последующим взятиемотделением сыворотки и смешиваниеченных типовых 0-сывороток в опреном соотношении или в зависимостититров,Однако иэвестнь,высокой активностита. алентныхичных1 еиоссосиз типокрови,м полуелен 10 Способ получения 0-антигеляют следующим образом.Культуры 39 серотипов вшивают на 1%-ной пептоннойв течение 4 час при 37 С,16 ют на агар, содержащий пеной мышцы (рН 7,6), Черезции при 37 С культуры с агфизиологическим растворомполученные микробные суспе20 2 час на водяной бане при 1ные суспензии отмывают дв,гическим раствором (рН 7,2в небольшом количестве физраствора и после контроля нИ,используют для иммунизации тй способ не обеспечива и специфичности препар ротип 17,18 30,31 ичем с иль отных. 6,С целью повышенифичности препаратасывороток серотиповмом сывороток се12,13,14,15,16,24,26,27,28,29,37,38,39,40, пр;17,18,19,30 имеютсыворотки серотипов активности и специешивают два объема 5,6,25 с одним объе ов 3,4,7,8,9,10,11, ,19,20,21,22,23, ,32,33,34,35,36 ыворотки серотипов тр антител 1:400, 24 25, 27, 32, 34 ибрионов выраводе (рН 7,6) затем пересеваревар из сердеч 18 час инкубаара смывают рН ,2), затем нзйи кипятят 00 оС, Кипячеажды физиоло ), суспендируют иологического512767 Составитель С. МалютинаРедактор Р Гончарова ТехредН. Андрейчук КорректорТ, Кравченко Заказ 243/13"- Тираж 629 Подписное ОНЯИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж 35, Раушская набд, 4/5Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул, Гагар на, 101 3Кроликов иммуннзируют по следующейсхеме. Первую и вторую инъекцию проводятйодкожно по 20 млрд. м. т., третью - внучсривенно по 5 млрд, м.т. Между инъекциямигвыдерживают интервал, равный Э суткам.На седьмые сутки после третьей инъекции 6животных обескровливают. Из полученных:сывороток после определения титра по гомологичной культуре готовят поливалентную вибрионную сыворотку.Препарат представляет собой смесь 0сывороток против вибрионов 39 серотнпов,Сыворотку против серотипов 3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40 берут по 0,1 мл, а против фсеротипов 2,5,6,25 - по 0,2 мл. При смешивании О с:ывороток в других соотношенияхотмечают или утрату свойотв агглютинировать отдельные серотипы, или отмечают появление неспецифических реакций,Препарат применяют в реакции агглютинации на стекле по обычной для этой реакцииметодике. Перед постановкой реакции сыворотку разводят 1:5 физиологическим раствором, рН,2,2В качестве контроля рекомендуют постановку реакции исследуемой культуры с физиологическим раствором.Культура, относящаяся к одному серотипу, должна давать положительную реакциюагглютинации с поливалентной вибрионнойсывороткой и не давать реакции с физнологичеокнм,раствором.Поливацентная вибрионнаФОагглютинирующая сыворотка была испытана с 39 серотипами, патопенных нехолерных" вибрионов ив практических условиях4Результаты проверки чувствительности и специфичности реакции с 39 серотипами патогенных вибрионов показывают, что все штаммы патогенных вибрионов 39 серотипов дают положительную реакцию агглютинации с поливалентной вибрионной сывороткойРезультаты практического применения пс. ливалентной вибрионной 0-агглютинирующей сыворотки показывают, что штаммы, идентэфицированные с помощью поливалентной вибрионной 0-агглютинирующей сыворотки, агглютинируются соответствующими тип оспецифнческими, за исключением штаммов вибрионов, которые агглютинируются поливаленч- ной вибрионной О сывороткой и физиологичес ким раствором на стекле. Эти штаммы в развернутой агглютинации не типируются. в формула изобретения Способ получения поливапентной агглютинирующей 0-сыворотки для идентификации нехолерных вибрионов путем смешивания типовых О-сывороток, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышенияактивности и специфичности препарата,смешивают два объема сывороток серотипов2,5,6,25 с одним объемом сывороток серотипов 3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17, 18, 19,20,21,22,23,24,26,27,28,29,Э 0,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40, причем сыворотки серотипов 17,18,19,30имеют титр антител 1:400, сывороткисеротипов 6,24,25,27,32,34-1:800, сыворотки серотипов 2,11,14,15,21,23,28,401:1600 и сыворотки серотипов 3,4,5,7,8,9,10,12,13,16,20,22,26,29,31,33,35,36,37,38,39 1:3200,