Способ токсикологического исследования мяса животных, вынужденно забитых при фузариотоксикозе

п 11 506398 Союз ьтоветских Социалистических Ресоублик(22) Заявлено 10,06.74 (21) 2037779/30 с присоединением заявкиКч 2 А 61 В 1000 Государстеенныи комите Совета Министров СССР по делам изобретенийи открытий 23 ритет ликовано 15,03,76, .Бюллетень1 53) УДК 615,7 Дата опубликования описания 29.06.7 2) Авторы изобретени Э. М, Хасанова и 1 О. И. Бойков сесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной санитари71) Заявител СОБ ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ МЯС ЖИВОТНЫХ, ВЫНУЖДЕННО ЗАБИТЫХ ПРИ ФУЗАРИОТОКСИКОЗЕ(54 анчиваются через т токсичности исИзобретение относится к животноводству, Известен способ токсикологического исследования мяса животных, вынужденно забитых при фузариотоксикозе, основанный на скармливании изучаемого мяса крысам, щенятам, котятам или мышам в течение 14 дней, Затем па основании выявления патологоморфологических изменений, возникших в паренхиматозных органах подопытных животных, которым скармливалось изучаемое мясо в течение 14 дней, делают заключение о токсичности мяса.С целью сокращения времени исследования по предлагаемому способу испытуемое мясо экстрагируют гомогенизированием его в фосфатно-буферном растворе, очищают и полученный экстракт вносят в различных разведениях в монослой культуры клеток паренхиматозных тканей и о степени токсичности мяса судят по тому, в каком разведении экстракт разрушает ткани.По предлагаемому способу определение токсичности мяса при фузариотоксикозе в однослойной культуре клеток основано на цито-токсическом действии токсина, то есть способности токсина или его метаболитов вызывать деструкцию клеток монослоя. Дегенеративные изменения клеток монослоя под воздействием токсина начинается через 20 - 24 час после внесения токсического экстракта в культуру и полностью зак36 - 48 час в зависимости оследуемого материала.Предлагаемый способ осуществляется сле дующим образом.Исследуемый материал (мышцы или паренхиматозные органы) в количестве 5 гр растирают с 5 мл ФБР в стерильной фарфоровой ступке со стерильным кварцевым песком О или гомогенезируют в специальных аппаратах. Полученную суспензию выдерживают при 4 - 6 С в течение одного часа, а затем центрифугируют в течение 20 мин при 3000 об/мин.11 адосадочную жидкость фильтруют через 5 фильтры миллипора, сливают в стерильныефлаконы и хранят до использования.Для определения токсичности мышечнойткани используют пробирки с хорошим сплошным монослоем клеток почки эмбриона свиньи О (СПЭВ). Для этого производится просмотркультур под микроскопом.Внесение экстракта в культуру. Предварительно из отобранных пробирок с культурой клеток сливают старую ростовую среду и вно сят по 1 мл испытуемого экстракта, разведенного в питательной среде 1: 5; 1: 20; 1: 40;1: 80; 1: 160; 1: 320; 1: 640; 1: 1280; 1: 1920;1: 2560.На вторые сутки производят учет результа- О тов реакции. Каждую пробирку просматрива506395 4 Составитель Э. Хазанова Редактор Н, Аристова Техред Т. Дмитриева Корректор О. Тюрина Заказ 1153/13 Изд.1247 Тираж 629 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 ют под малым увеличением (7 К 10) микроскопа и определяют ЦТД токсического экстракта (условно ц.крестах), Пробирки с явным поражением клеток, 1 чонослоя складывают отдельно, остальные пробирки вновь помещают при температуре 37 С.Окончательный учет результатов производится через 48 час после внесения в культуру экстракта. Одновременно просматривают и контрольные пробирки. Результаты определения токсичности исследуемого экстракта являются достоверными при сохранении моно- слоя в контроле. П р и м е р. Из мяса овец, вынужденно забитых при различных течениях экспериментального фузариотоксикоза, готовили различные разведения экстракта на питательной среде и вносили по 1 мл во флаконы с культурой ткани СПЭВ. Через 24 час производили учет реакции, отметив при этом, что при внесении мышечного экстракта, полученного при хроническом опыте, клетки СПЭВ разрушались в разведении 1:2000, в то время как при подостром опыте - в разведении 1:1200. При остром опыте и контроле клетки не разрушались.Аналогичные по степени токсичности результаты были получены параллельно на крысах, которым скармливали мясо от тех же животных. Крысы, поедавшие мясо животных, забитых при подостром токсикозе, заболевали на14 день с начала скармливания, а при хроническом токсикозе на 8 - 10 день, При вскры 5 тии крыс наблюдали патологоморфологические изменения в паренхиматозных органах,Крысы, поедавшие мясо от контрольныхживотных и животных, забитых при остромтоксикозе, оставались живыми,10 Таким образом, установленная закономерность позволяет предложить способ определения токсичности мяса при фузариотоксикозе на культуре ткани СПЭВ и других клетках.15 Формула изобретенияСпособ токсикологического исследованиямяса животных, вынужденно забитых при фузариотоксикозе, включающий выявление па тологоморфологических изменений в тканяхпаренхиматозных органов животных по дегенеративному изменению в них, отличающ и й с я тем, что, с целью сокращения времени исследования, испытуемое мясо экстраги руют гоцогенизированием его в фосфатно-буферном растворе, очищают и полученный экстракт вносят в различных разведениях в монослой культуры клеток паренхиматозных тканей и о степени токсичности мяса судят по 30 тому, в каком разведении экстракт разрушает ткани.