Способ окраски форменных элементов гемолимфы гусениц чешуекрылых хвоелистогрызущих насекомых

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ п 11 48215 У Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 08.06.73 (21) 1930117/30 с присоединением заявки ЪЪ(23) ПриоритетОпубликовано 30,08,75. Бюллетень3Дата опубликования описания 18.12,75 1) М. Кл. А 011 67/00С 121 с 1,00 Государственнын комитет Совета Министров СССР по делам изобретенийи открытий УДК 578.65(088.8 72) Автор изобретения ехов институт 1,.: .,1) Заявитель учно-исследовательсклесного хозяйства орусс(54) СПОСОБ ОКРАСКИ ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТО ГЕМОЛИМФЫ ГУСЕНИЦ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ ХВОЕЛИСТОГРЫЗУЩИХ НАСЕКОМЫХправильного выбора Изобретение относится к энтомологии, а именно к диагностике физиологического состояния форменных элементов - гемоцитов гемолимфы насекомых, в частности к способам окраски форменных элементов гемолимфы гусениц чешуекрылых хвоелистогрызущих насекомых,Известен способ окраски фиксированных мазков гемолимфы, заключающийся в том, что осуществляют окраску форменных элементов гусениц раствором нейтрального красного на основе жидкости Рингера и последующую сушку и фиксацию мазков,Однако известный способ окраски фиксированных мазков гемолимфы насекомых не дает возможности выявить интимные стороны биологического состояния гемоцитов, а в этой связи и наличие раздражителей в исследуемом организме, так как процесс сушки и фиксации мазков вызывает комплекс необрати мых изменений в клетках. Окраска фиксированных препаратов гемолимфы дает возможность исследовать только строение гемоцитов, но не дает возможности исследовать их функциональное состояние. Кроме того, для известного способа характерны сложность проведения диагностирования и невозможность точного определения физиологического состояния гемоцитов насекомых при диагностическом исследс 1 зании состояния популяции вредителя длясредств борьбы с ним.Цель изобретения - упростить диагностирование и повысить точность определения 5 физиологического состояния гемоцитов насекомых при диагностическом исследовании состояния популяции вредителя для правильного выбора средств борьбы с ним.Для этого берут гемолимфу лейкоцитарным 10 меланкером, дополняют раствором красителя в соотношении гемолимфы к красителю 1: 20, затем смешивают и выдерживают смесь в течение 10 - 35 мин.Способ осуществляют следующим образом.15 Для того чтобы произвести прижизненнуюокраску гемоцитов гемолимфы насекомых, готовят раствор нейтрального красного на основе жидкости Рингера, предпочтительно 0,1/о-ной концентрации. Затем при помощи 20 лейкоцитарного меланжера после прокола гусеницы между первой - второй парой ложно- ножек берут гемолимфу, Заполняют ею меланжер предпочтительно до метки 0,5.Дополняют меланжер с гемолимфой ра створом красителя, предпочтительно до метки 11, в результате чего получают разведение гемолимфы в растворе красителя с соотношением 1: 20, После этого смешивают в самом меланжере гемолимфу с раствором краски ЗО путем встряхивания, и выдерживают полуРедактор М, Дмитриева Заказ 3061/5 Изд. Мз 1764 Тираж 619 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб, д, 4,5Типография, пр. Сапунова, 2 ченную смесь в течение времени, достаточного для завершения окрашивания гемоцитов, но недостаточного для соединения краски с белковым комплексом жидкой части гемолимфы (экспозиция должна составлять 20 - 35 мин, предпочтительно 15 - 20 мин). Объемные соотношения гемолимфы к раствору красителя и экспозиция взаимосвязаны и поэтому должны выбираться из условия обеспечения устойчивости картины окрашивания, необходимой на период последующего исследования гемолимфы.Предлагаемый способ опробован в лаборатории микробиологии отдела биологических методов борьбы с вредителями леса Белорусского НИИ лесного хозяйства и показал положительные результаты, Благодаря простоте диагностирования и средств осуществления при благоприятных условиях способ можно использовать непосредственно в очагах массового размножения вредителей-насекомых, что служит исходной основой для диагностических исследований состояния популяции вредителя, предшествующих выбору мер борьбы с ним. 5 Предмет изобретения Способ окраски форменных элементов гемолимфы гусениц чешуекрылых хвоелистогрызущих насекомых, например соснового 10 шелкопряда, раствором нейтрального красного на основе жидкости Рингера, отл и ч аю щ и й с я тем, что, с целью упрощения диагностирования и повышения точности определения физиологического состояния гемоци тов насекомых при диагностическом исследовании состояния популяции вредителя для правильного выбора средств борьбы с ним, берут гемолимфу лейкоцитарным меланжером, дополняют раствором красителя в 20 соотношении гемолимфы к красителю 1:20,затем смешивают и выдерживают смесь в течение 10 - 35 мин.