Способ получения противогрибкового антибиотика

(23) Приоритетоеударетвеиныи номите СССР по делам изобретений и открытий.Держинский есоюэный о-исследовательский инститФитопатологии аявнтель ОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВОГРИБКОВАНТИБИОТИКА(54 армаимени Изобретение относится к Ф цев" тической промышленности, а о к производству антибиотиков.Известен способ получения препарата противогрибкового антибиотика, и заключающийся в том, что культуральную жидкость З(йеосбад(ц е 1 еюа 1 ц юбасс. экстрагируют хлороформом и отгоняют растворитель под вакуумом, а остаток растворяют в спирте или ацетоне, прибавляют водный раствор твина и разбавляют водойОднако такой способ не обеспечивает получения чистого целевого про" дукта в кристаллическом видеПредлагаемый способ отличается от; известного тем, что экстракт обрабатывают этанолом, отгоняют раствсритель, остаток многократно экстрагируют смесью петролейного эфира и четыреххлористого углерода, из .объединенного экстракта выделяют путем выдерживания на холоде кристаллический продукт, который подвергают хроматографии на колонке силикагеля, элюируют хлороформом, а затем хлороформом, содержащим возрастающие коли" чества этилацетата, активные фракции объединяют, отгоняют в вакууме растворитель, и целевой продукт подвергают очистке путем повторной кристаллизации из смеси петролейного эфи,ра и четыреххлористого углерода, илииз водного ацетона, или из водного:спирта,П р и м е р 1. Фильтрат культуральной жидкости (КЖ)9,1 ерпаЫтп с содержанием антибиотика не ниже 30-50 мг/лэкстрагируют при рН 2 петролейным эфиором (температура кипения 40-70 С) израсчета КЖ; растворитель : 2:1 дляудаления липидов и нейтральных веществ, После разделения сепарированием или центрифугированием оставшийся фильтрат КЖ дважды экстрагнруютхлорированным углеводородом (хлористый метилен четыреххлористый углеродили хлороформ) при соотношении КЖ::растворитель : 2:1. Объединенныйэкстракт высушивают над сульфатоммагния, Фильтруют. Растворитель испаряется в вакууме в роторном испарителе при комнатной температуре. В остатке получают смолистый пигментированный продукт, Выход общего продуктав среднем 0,25-0,4 г с 1 л культуральной жидкости. Содержание антибиотикапо весу составляет примерно 5-10,Из 7,3 г общего продукта, полученного из 20 л Фильтрата КЖ, антибиотик,405235 ЦНИИПИ Заказ 7858/1 Тираж 6 И Подписное Филиал ЦПП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4 извлекают многократной экстракцией этанолом (порциями по 30-40 мл) при тщательном перемешивании и комнатной температуре. Общий объем объединенно- го экстракта составляет 200-300.мл. После испарения растворителя,. в вакууме в роторном испарителе и при 5 комнатной температуре в остатке получают 5,6 г продукта с содержанием 10-15 В по весу антибиотика. Дальнейшую очистку осуществляют экстракцией антибиотика из вновь полученно го продукта смесью петролейный эфирчетыреххлористый углерод ( 95:5, объемные соотношения), нагретой до температуры не выше 40 С, Экстракцию проводят многократно небольшими пор- Ц циями по 30-40 мл растворителя при тщательном перемешивании, Общий объем объединенного экстракта составляет 300 мл. Объединенный экстракт выдерживают при 0 С в холодильнике до полоного образования кристаллического продукта, который затем отделяют от маточника фильтрованием. В результате получают около 0,5 г кристаллического продукта желтого цвета с содержанием 70-80 по весу антибиотика.Часть полученного кристаллического продукта в количестве 0,2 г хроматографируют в колонне (3,5 х 70 см) на силикагеле.Элюацию проводят фракционно сначала хлороформом, затем хлороформом, :содержащим возрастающие количества этилацетата. Содержание антибиотика во фракциях определяют био-методом, используя чувствительные тест-объекты З 8 5, рдбСа иа я ць или Епдоеусев атее в 11 .Активные фракции, сОдержащие антибиотик, объединяют, и растворитель испаряют в роторном испарителе в вакууме при комнатной температуре, Получается 40 0,12 г антибиотика в виде кристаллического продукта белого цвета с температурой плавления 212-214 С. Очищенный кристаллический препарат антибиотика растворяют в смеси петролейного 45 эфира с .четыреххлористым углеродом (95:5, объемные соотношения), нагретой до температуры не выше 40 С. Раствор отфильтровывают от примесей и выдерживают при О С до полного об разования кристаллического продукта. Антибиотик отделяют фильтрованием от маточника и повторно кристаллизуют в смеси петролейного эфира и четырех- хлористого углерода (99:1 или 99,5: :0,5, объемные соотношения) . В результате получают белый кристаллический препарат антибиотика с темгратурой плавления 2140 С,Я ) -34,3 С (этанол)Общий выход антибиотика составляет в среднем 25-35 от исходного содержания в культуральной жидкости.П р и м е р 2, Фильтрат культуральной жидкости З.1 егпО 10 щ с содержанием антибиотика 100-200 мг/л обрабатывают петролейным эфиром, как описано в примере 1. После разделения сепарированием или центрифугированием оставшийся фильтрат КЖ дважды экстрагируют диэтиловым эфиром при соотношении КЖ: :растворитель : 2:1. Объединенный экстрат высушивают над сульфатом магния, фильтруют, и растворитель удаляютИз, 4,6 л культуральной жидкости получают в среднем 1,8 г продукта с содержанием антибиотика45 по весу. Полученный продукт перерабатывают дальше, как описано в примере 1.П.р и м е р 3, Кристаллизация очищенного препарата (пример 1) осуществляется в водном спирте (или в водном ацетоне). Для этого навеску препарата растворяют в небольшом объеме растворителя (примерно 0,5 мл растворителя на 20 мг вещества) при темПературе около 40 С, после чего к раствору добавляют постепенно дистиллированную воду до небольшого помутнения раствора, Раствор выдерживают при 0 С до полного образования0кристаллического продукта. После фильтрования и высушиваиия получается мелкодисперсный порошок антибиотика белого цвета с температурой плавления 214 С. Формула изобретения.ЪСпособ получения противогрибковогоантибиотика из хлороформного экстракта культуральной жидкости Здщосо 60 п 1 1 егпаоп)басс, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью получения чистого целевого продукта в кристаллическом виде, экстракт обрабатывают этанолом, отгоняют растворитель,остаток многократно экстрагируютсмесью петролейного эфира и четыреххлористого углерода,. из объединенного экстракта выделяют путем выдер"живания на холоде кристаллическийпродукт, который подвергают хроматографии на колонке силикагеля, элюируют хлороформом, а затем хлороформом, содержащим возрастающие количества этилацетата, активные фракцииобъединяют, отгойяют в вакууме растворитель, и целевой продукт подвергают очистке путем повторной кристаллизации из смеси петролейного эфираи четыреххлористого углерода, илииз водного ацетона, или из водногоспирта,