403407

р ,ля О П И "-"И - ЕИЗОБРЕТЕН И К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ 403407 Союз СоветоахСоциалистицескихРеспублик Зависимое от авт. свидетельстваЗаявлено 26.1.1968 ( 1220355/31-16, Кл. А 611 1 с присоединением заявкиосударствеииый комитетСовета Министров СССРло делам изобретений риоритетпубликовацо 26.Х.1973. Бюллетеньата опубликования описания 14.111.19 ДК 615,739(088.8) открыт вторыобретения. И, Коломийченк А, К, Покотилен Заявител вский научно-исследовательский институт отоларингологии Б ПОЛУЧЕНИЯ БИОСТИМУЛЯТОРА- 10-цедельцые человечески жают в среду199 ил Изобретение относится к технологии производства медикаментов из веществ животного происхождения.Известен способ получения биостимулятора, согласно которому плацецту отмывают дистиллированной водой и в бриллиацтовой зелени, выдерживают при 2 - 4 С, отмывают дистиллированной водой, измельчают, настаивают при комнатной температуре, далее нагревают на водяной бане при 70 - 80 С, фильтруют, фильтрат кипятят 2 мин, вновь фильтруют, ампулируют и стерилизуют.Целью изобретения является повышение биологической активности препарата.Это достигается тем, что эмбриональную ткань человека, например 8 - 10-недельные эмбрионы после измельчения промывают, обрабатывают трипсицом, клетки отделяют, отмывают, суспендируют и культивируют в питательной среде в течение 7 - 8 суток при температуре около 37 С, после чего из культу- ральной жидкости целевой продукт отделяют и очищают центрифугировацпем. Ткань обрабатывают 0,2 - 0,4%-ным раствором трипсица при перемешивании и температуре около 37 С. Для культивирования посев производят из расчета 1 млн. клеток па 1 мл питательной среды.Пример. 8е эмбрионы погруи 0,5%-цый раствор гцдралцзата лактальбумцна, содержащие по 500 сд. пенициллина ц стрептомпццца в 1 мл с добавлением до 10% цативпой донорской сыворотки из крови со ответству 1 ощсго биологического вида. В такой среде эмбриональную ткань добавляют и месту переработки ц храпят прц температуре 2 - 4 С це более 24 час (крайний срок использования - 48 час 1.10 Затем ткань измельчают до кашпцеобразцого состояния и до 5 раз промывают такой же средой, в какой ее рацили, с добавой антибиотиков.После промывки измельченную ткань поме щают в плоскодонную колбу ц заливают 0,2 -0,4%-цым раствором трипспца, который берут в избытке по отцошецшо к ткани ц перемешивают содержимое в течение 1 час прп температуре не более 37 С, В результате получают 20 суспензию отдельць;х клеток в растворе трцпсина, от которого пх отделяют цецтрцфугцровацием прц 1,5 тыс. об/мцц и отмывают от остатков трипсцца в среде199 цлц в 0,5%- цом растворе гидролпзата лактальбумица, в 25 зависимости от того, какая цз этих двух средбудет использована для культивирования.Осадок отмытых клеток ресуспецдируют всреде199 илц 0,5%-цом растворе гидролцзата лактальбумица, содержащих по 100 ед, 30 пенициллина ц стрептомццина на 1 мл пита403407 Составитель Т. ГоловинаТехред Е. Борисова Корректор Л. Новожилова Редактор Д. Пинчук Заказ 572/5 Изд, Мв 199 Тираж 467 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д, 475Типография, пр. Сапунова, 2 тельной среды, многократно пипетируя суспензию для разделения конгломератов клеток.Посев в стерильные стеклянные матрицы производят из расчета 1 млн клеток на 1 мл питательной среды после подсчета их концентрации в камере Горяева. Матрицы помещают в термостат и выдерживают при 37 С до образования хорошо выраженного клеточного пласта (обычно 7 - 8 суток), после чего культуральную среду отсасывают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин.Полученная таким образом свободная от клеток прозрачная надосадочная жидкость оранжево-желтого цвета и является биостимулятором. Предмет изобретения1. Способ получения биостимулятора из ткани путем ее измельчения с последующим выделением целевого продукта, отличающийсятем, что, с целью повышения биологическойактивности препарата, эмбриональную тканьчеловека, например 8 - 10-недельные эмбрионы после измельчения промывают, обрабатывают трипсином, клетки отделяют, отмывают,суспендируют и культивируют в питательнойсреде в течение 7 - 8 суток при температуреоколо 37 С, после чего из культуральной жид 10 кости отделяют целевой, продукт и отмываютцентрифугированием,2. Способ по п. 1, отличающийся тем, чтоткань обрабатывают 0,2 - 0,4/о-ным раствором трипсина при перемешивании при темпе 15 ратуре около 37 С,3. Способ по п, 1, отличающийся тем, чтодля культивирования посев производят израсчета 1 млн. клеток на 1 мл питательнойсреды.