Штамм arthrobacter simplex инми-6 продуцент ацетилхолинэстеразы

О П И С А Н И Е 395435ИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистимеских Реслу 6 ликЗависимое от авт. свидетельства-Заявлено 04.7111.197 689065/31 2 д 13,0 оединением заявки Ы осударствениый комитетСовета Министрва СССР ва делам изавретений оритет -Опубликовано 28 Х 111.1973. Бюллетень М 35 ДК 577,158.47108 рытии та опубликования описания 20.Х 11.19 Лвторыизобретения А. А. Имшенецкнй, Л, С. Попова и Н. Ф, К Институт микробиологии АН СССР ова Заявител ШТАММ АгйгоЬас 1 ег ягпр 1 ех ИНМИПРОДУЦЕНТ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЬ2 я к ооласти мнкр тамма Аг 111 гоЬаг 1 Изооретение относ,биологии и касаетсяэ 1 гпр 1 ех ИНМИ.Известен штамм Рве11150, продуцирующийянктивность,которого порования на триптическо0,8 ед,Однако извесгныйацетилхолинэстер азу ввах. доп 1 опаэ Пцогевсепэ ацетилхолинэстеразу, че 5 суток культввцоулъоне, ссставляет штамм сцнтезцрт ет ебольших количестЦель изооретеция - получение штамма с более высокой ацетилхолинэстеразной активностью.Поставленная цель достигается тем, что предлокен штаьмм АгйгоЬас 1 ег з 1 гпр 1 ех ИНМИ, продуцирующий ацетилхолицэстеразу, у которого бесспоровые неподвижные палочки размером 2,0 - 4,0 ХО,5 - О,бр со старением укорачиваюгся до размеров кокков 0,5 - 0,8 Х 0,5 - О,бр. Штамм грамвариабилец, кокки в осиовном грамположительные гетеротроф, факультативный аэроб, оп.,имальная температура рооста 28 - 30 С, Хорошо растет на естественных средах; мясо-пептонных, картофельных, сусле, на средах с пептоном, отдельными аминокислотами, мочевиной. Колонии белого цвета инопда с кремовым оттенком, выпуклые, матовые, глад(кие или слегка складчатые, большей частью с ровным краем. На мясо-вептонцом бульоне образует ооцльную муть ц слизистый осадок на дне. На синтетических средах с глюкозой и фосфорнокцслым двуза,мещенным аммонием растет хоро шо; колонии белого цвета, мелкие, блестящие,гладкие, с розным краем. Молоко подщелачивает, пептонизирует без коагуляццц ца 4-ые сутки. Желатину це разжижает, цо образует плотную пленку ца позерхности. Использует глюкозу, галактозу, сахарозу, дулъцитицозит, сорбит, уксусную, яблочную, фумаровую, янтарчую и лимонную кислоты без выделения СО 2, С выделением углекислоты использует маннозу, фруктозу, араоицозу, раффинозу ц а маннит. Не ассимилирует ксилозу, крахмал ицеллюлозу, Хорошо использует аммоццйцый минеральный азот, аминокислоты, в том числе серусодержащие: цистин и цистеиц, мочевину и пелтон, хуже использует нитраты; ооразует о ацетилхолинэстер азу и уреазу, активностьацетилхолинэстеразы после :вгх с,ток культивирования на синтетической среде с глюозой составляет 60 ед.П р и м е р. Г 1 редложенный штамм выращивают на среде следующего ссстава (в %):К 2 НР 0 - 0 1, КНеР 04 0,01, ГМН 4);НР 00,2; Мд 504 - 0,03; Са С 1 - 0,01; Ма С 1 - 0,01; Мп 504 и Ге 504 - следы, дрожжевой экстракт 0,01, глюкоза - 1,0; в качестве индуктора до бавляют ацетилхолин - 0,01 Ч 0, рН - 7,0.395435 П р ед м е т,из об р е ген ия Составитель С. ЩеневаТехред Е. Борисова Редактор Д. Пинчук Корректоры Е, Михееваи Е. Миронова Заказ 693/2275 Изд. ЛЪ 944 Тираж 467 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Тип. Харьк. фил. пред. Патент Ферментацию ведут 48 час в аэрооных условиях на качалке при 180 об/ясссн при 30 С. Инокуляцию проводят водной суспензией клеток одно-двухсуточной, культуры, выращенной на скошенном мясо-пептонном агаре. Посевной,материал вносят из расчета 50 .тсг на 50 лл питательной среды. При таком режпсме культивирсваиия получают до 350 - 400 пса оиомассы со 100 лсл среды. Для извлечения ацетилхолинэстеразы огцентрифугированнуо и промытую 2 раза 1/15 м фосфатным буфером рН - 7,2, биомассу разрушают на ультразвуковом дезвнтеграторе МЯЕ прои 9 ясгц 7 мин. Разрушенную биомассу отделяют центрифугированием при 30000 об/лпсн 3 1 син.1 лсг белка полученной надосадочной жидкости разлагает 0,7/ссЧ ацетилхолина за 20 иссн или 2,1/сМ за 1 час. Штамм АгйгоЬас 1 ег з 1 гпр 1 ех ИНМИпродуцент ацетилхолинэстеразы, огличаюсцссйся тем, что бесспоровые 1 ноподвижные палочки размером 2,0 - 4,ОХ 0,5 - О,бр, со старением у 1 корачиваюгся,до кокков 0,5 - 0,8 Х 0,5 - 0,6 сс, грамвариабилен, коскки в основном грамположительные гетеротроф, фа 1 культативный аэроб, опгималыная температура роста 28 -30 С; хорошо растет на естественных средах: мясо-пептонных, картофельных, сусле; на средах с пептоном, отдельными аминокислотами, мочевиной;,колсиии белого цвета, иногда с кремовым оттенком, выпуклые, матовые, гладкие или слегка складчатые, большей частью с розным краем; на мясо-пептгнном бульоне образует обильную муть и слизистый осадок на дне; на синтетичесских средах с глюкозой и фосфорнокислым двузамещенным 10 амсмонием растет хорошо; колонии белого цве.та, мелкие, блестящне, гладкие с ровным краем; молоко подщелачивает, пептонизирует без коатуляции на 4-ые сутки; желатину не разжижает, но образует плотную плено на 15 поверхности. Использует глюкозу, галактозу,сахарозу, дульцит, инозит, сорбит, уксусную, яблочную, фумаровую, янтарную и лимонную кислоты без выделения СО,; с выделением утлекислоты непользует маднозу, фрусктозу, 20 арабинозу, раффинозу и маннит; не ассимилирует ксилозу, крахмал, целлюлоз 1 у, хорошо использует аммонийный минеральный азот, аминокислоты, в том числе серусодержащие: цистин и цистеин, мочевину, нептун, хуже ис пользует нитраты; образует ацегилхолинэстеразу и уреазу, активность ацетилхолинэстеразы после двух суток культивирования на синтетической среде с глюкозой составляет 60 ед.