375829

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ 375 В 29 Союз Советских Социалистических Республик. Кл Комитет по делам зобретений и открыти при Совета Министров СССР615.8 (088.8 197 ата опубликования описания Авторытзобретени Иностранцы Хорст Тепфер и Клау(Германская Демократическ Иностранная фи фЕБ АрцнаймительверПиш Рес лика) Заявите Дрезден Республи ОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДА ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОй АКТИВНОСТГО Зависимый от патентаИзобретение относится к производству биологически активных, препаратов и касается способов выделения фибринолитпческого энзима.Известны способы выделения фибрпнолитического энзима из культуральной жидкости плесневых грибков.Однако оган не обеспечивают получение достаточно чистых препаратов, пригодных для терапевтического использования,Целью изобретения является повышение качества фибринолитического эпзнма.Достигается это тем, что культур альную жидкость грибка АзрегрИиз ос/сгасеиз экстрагируют водным буферным раствором, экстракт пропускают через анионообменную смолу, например ДЕАЭ-сефадекс, биологически активное вещество осаждают смешивающимся с водой органическим растворителем, осадок высушивают, растворяют в воде, подвергают гельхроматографии, и протеазосодержащие фракции высушивают.В качестве буферного раствора используют 0,05 - 0,1 М тряс-НС 1 или 0,05 - 0,1 М ацетат аммония,Осаждение биологически актссвного вещества производят этиловым спиртом при охлаждении до минус 20 С,П р и м е р 1, 50 г неочищеннои смеси энзимов, выделенной из культуры АзрегдИиз осйгасеиз с общей протеолитической активностью 1,4 КЕ/мг, четырежды экстр агируют порциями по 200 лсл 0,05 М трис-НС 1 буферным раствором при рН 7,2 путем перемешивания в течение 15 мин. Объединенный экс-. тракт отделяют от взвеси центрифугированием прп 15000 обслсин, охлаждают до 0 - 4 С и пропускают через колонну с ДЕАЕ-сефадексом А(диаметр колонны 10 см, высота слоя 18 см). Из полученного фильтрата биологически активное вещество осаждают дооавлением трехкратного объема охлажденного до минус 20 С этилового спирта. Для полноты осаждения смесь оставляют при этой же температуре на ночь. Выделившийся осадок отделяют центрифугированием, промывают спиртом и ацетоном и сушат. Получают 4,43 г фибринолитнчески активной протеазы с активностью 11,6 КЕ/мг. 1,5 г этого препарата смецтивают с 8 лсл воды и отделяют нерастворнвшийся остаток центрифугированием при 5000 об/мссн, Раствор пропускают через колонну с набухшим в воде гелем сефадекса Г(диаметр колонны 2,5 слс, высота слоя 95 см) при температуре 0 - 4 С. Элюацпю осуществляют дистиллированной375829 Предмет изобретения Составитель Б. Таратута Техред Е. БорисоваКорректор Н. Стельмах Редактор Н. Спиридонова Заказ 1750/9 Изд.1386 Тираж 467 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 водой фракциями по 20 мл. Фракции с 12 по 18 содержат биологически активные вещества. Эти фракции сушат замораживанием и получают 616 мг белого, хорошо растворимого порошка с удельной протеолитической активностью 15,7 КЕ/мг. Пример 2. 20 г смеси энзимов с обще.г протеолитической активностью 1,0 КЕ/мг экстрагируют, как это описано в примере 1, раствор пропускают через колонну, заполненную ДЕЛЕ-целлюлозой (диаметр колонны 4,5 см, высота слоя 15 см), промытой 0,05 М трисНС 1 буферным раствором,при рН 7,2, Затем колонну вновь промывают буферным раствором, а из фильтрата осаждают биологически активное вещество, как это описано в примере 1. Получают 3,19 г препарата с активностью 4,5 КЕ/мг, который затем подвергают гельхроматографии для получения высоко- очищенного вещества,1. Способ выделения вещества, обладающего фибр инолитической активностью из 5 культуральной жидкости плесневых грибков,от,гичающийся тем, что, с целью повышения качества препарата, культуральную жидкость грибка АарегдИия ос/ггасеив экстрагируют водным буферным раствором, экстракт про пускают через анионообменную смолу, например, ДЕЛЕ-сефадекс, биологически активное вещество осаждают смешивающимся с водой органическим растворителем, осадок высушивают, растворяют в воде, подвергают гель хроматографии, и протеазосодеркащие фракции высушивают.2, Способ по и. 1, отличающийся тем, что,в качестве буферного раствора используют 0,05 М - 0,1 М трис-НС 1 или 0,05 - 0,1 М ацетон 20 аммония.3. Способ по и, 1, отличающийся тем, чтобиологически активное вещество осаждают этиловым спиртом, охлажденным до - 20 С.