353956

353956 Соос Советских Социалистических РеспубликЗависимое от авт. свидетельства М Заявлено 19 Л 11.1971 ( 1634957/28-13)с присоединением заявки ЛПриоритетОпубликовано 09.Х.1972. Бюллетень М 3Дата опубликования описания 9.Х 1,1972 М, Кл, С 12 с 13/10 С 07 о 7/О)8Комитет по долам обретений и открыт ри Совете Министре СССР, Гулый, Л. В, Гудкова и В нститут биохимии АН Украинскои 1 явитель ВЫДЕЛЕНИЯ ОЧИЩЕННЫХ ФЕРМЕНТ ПРЕПАРАТОВ КАТАЛАЗЫ Изобретение относится к фермецтцой промышлеццости.Известец способ выделения очипсиных фермсцтных препаратов каталазы из культуральцой жидкости плесцевого гриба Реп)С 1111 гцп 5и 1 Яс Р)с 1 ор.с 1 В 11 Я 1 путем адсорбции сс, отделения адсорбецта с каталазой, например,центрцфугцровацисм, выделения каталазыэлюцией ц осаждсццсм спиртом.Предлагаемый способ по сравцецшо с цзвестнымц является более простым и Обесцсчивает достаточно полное выделение ферм цтаиз кулэтуралыОЙ жидкости. Дл 51 это 0 предлагается проводить адсорбцию ца гель фосфата кальция цепосредствеццо из культуральцой 1жидкости путем ввсдсчшя в цес црц перемсшивацци равцых объемов 0,5 М растворов шестиводного хлористого кальция и двухосцовногофосфорцокцслого натрия, причем адсорбццюведут при р 1-1, преимущественно равном 8,0 - 28,6, а элюцию - раствором одцоосновного фосфорцокислого калил,Способ выделения очищеццых фермецтцыхпрепаратов каталазы осуществляется следующим образом. 2К культуральцой жидкости при р 11 8,0 - 8,6прибавляют при перемешивации одновременноравцые объемы 0,5 М растворов шестиводцогохлористого кальция и двухосновцого фосфорцокислого натрия в количестве, рассчитанном 3 ца содержяцце каталазы в культуральнои )кид- кости и сорбциоцной емкости образуемогогсля, На гель, образоваццьш из 1 мл 0,5 М раствора шестцводцого хлористого кальцияи эквцмолярцого количества двухосновцого, фосфорцокцслого цзтрця, сорбцруется н сред-, нем 5000 ед. к Ят Ял а зы. Это соотнетс Гвует, сороццц ца Гель, Ооразс)ВЯНИ ЫЙ пз 1 с. 1 несц. ) ВОДНОГО ХЛОРИСТОГО 1,ЯЛЬЦЦ 51 Ц ЭКВЦМОЛЯРНОГОколичества фосфорцокцслого Натрия, 50,000 ед. кятялазы. Адсорбцровшгнук) кяталазу элюцруют 0,5 М раствором ОдцоосноиОго фос- форцОкислОГО калц 51, црибаВля 51 последний в колцчесгвс, равном 70% от объема црцбав- ленного раствора хлористого к)льцц 5.Элюццю проводят цри интенсивном переме пВзццц смеси ц тсчецце 30,Ии. Затем эл 1 оа Отделяют цецтрцфупроваццсм, Осадок геля пресывают цз центрифуге О,ЗМ раствором од-, цоосцовного фосфорцокцслого калия, прцбав- ля) его в количестве, равном 1/з от Обьема элюата, Элюзт ц промывной раствор смеши-, Вают, содср)кацис ка 1 алязы в смеси сосгзвляст 80 - -90% От количества сорбцровашьго фересцГ 11. 11 з цол 11 еццс)г рзстВОр 1 катзлзз)сзждяот полут)рцэ 5 Объс)10 м спирта, цзцрц- мер этилового, прц температуре 0 - 4 С илц изопропнлового при комцатцой температуре Осадок отделяют цсцтрнфугцрованцсм, рястворяют в воде, вторично псрсосаждают тем же: авторыизобретения Р, Г. Дегтярь Р353956 Предмет изобретен и я Составитель М, Ларина Техред А. Камышникова Корректор Л. Царькова Редактор А. Бер Заказ 3700/9 Изд. М 1493 Тираж 406 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская наб 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 спиртом, растворяют в воде, диализируют против воды и высушивают в вакууме. Выход каталазы в препарате составляет 70 - 80/о от его содержания в культуральной жидкости. Полученные препараты содержат в 1,цг 5000 - 8000 сд. каталазы. 1, Способ выделения очищенных ферментных препаратов каталазы из культуральной жидкости плесневого гриба Реп 1 с 1111 цгп л 1 а 1 е РЫор 1. е 1 В 11 а 1 путем адсорбции ее, отделения адсорбепта с каталазой, например, центрифугированием, выделения каталазы элюцией и осаждением спиртом, отличающийся тем,что, с целью более полного выделения каталазы и упрощения процесса, адсорбцию проводят на гель фосфатс кальция пепосредствсн 5 но из культуральной жидкости путем введения в нее при перемешивании равных обьемов0,5 М растворов шестиводного хлористогокальция и двухос нов ного фосфор нокисло гонатрия,10 2, Способ по п. 1, отличающийся тем, чтоадсорбцию ведут при рН, преимущественноравном 8,0 - 8,6.3. Способ по пп, 1 и 2, отличающийся тем,что элюцию ведут раствором одноосновного15 фосфорнокислого калия.