Способ получения вещества, обладающего гепариноподобным действием

342629 О П И С А Н И Е ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советскими Социалистическиа РеспубпииТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ависимое от авт, свидетельства К Кл. А 611 с 1718 явлено 01,Ч 1.1970 ( 1456635/31-16) исоединением заявкиКомитет по делам вобретений и открытий при Совете Министров СССРБюллетень20 Дата опубликования описания 18.И 1.1972 Авторызобретения К, А. Шевцова, Н, Н.К. М. Лакин, В.3, Б ятницкий, В, М. Жм , Ефимов, В. М. Ца Идельчик и А. Т. М чно-исследовательскпромышленности инченко, М. А, Иноземцевренков, Н, М, Рукина,кроусова Всесоюзный й институт мясной аявитель ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ГЕПАРИНОПОДОБНЫМ ДЕЙСТВИЕМ2 етение относится к способам огически активных веществ, лучению биологически активн обладающего гепариноподобн отходов производства ге олуче- именго вем дейтен способ получения вещества, облагепариноподобным действием. Предй способ отличается от известныхлегкие животных подвергают эксводным раствором хлористого нат рН 8,5 - 9, подкисляют до рН 2,5 - 3 обрабатывают раствором, содержаориды натрия и кальция при рН 9 - следующим осаждением 96-ным спирарина-сырца, который обрабатывают 15 итическими ферментами при рН 8,5 - ят рН до 2,3 - 2,5, центрифугируют, в добавляют спирт 96-ный при рН 8 - еленный осадок обрабатывают двуым натрием, пергидролем, спиртом 20 при рН 7,6 - 8 отделяют маточный добавляют спирт 96-ный в количе/о к объему раствора, отделяют осаабатывают водным раствором хлориалентного металла, спиртом 96-ным, 2 Б с водным раствором двууглекислогоосаждают целевой продукт спиртом при рН 6,5 - 7.сть изобретения заключается в том, логически активное вещество гепарн- З 0 Изобрния биолно к пощества,ствием.Извесдающеголагаемытем, чтотракциирия приосадокщим хл9,5 с потом геппротеол9, доводраствор85, выдуглекисл96-нымраствор,стве 50док, обрда двухвкипятятнатрия и96-нымСущночто био ноид выделяют изпарина.П р и м е р, 150 кг промытых от сгустков крови легких измельчают и экстрагируют 300 л 5%-ного раствора поваренной соли при рН 8,5 - 9,0, устанавливаемым добавлением 20% -ного раствора едкого натра при температуре 60 С в течение 1,5 часа. Осаждение из экстракта гепа рина-сырца производят соляной кислотой при рН 2,5 - 3,0. Полученный сырец обрабатывают 15% -ным раствором хлористого натрия с добавлением раствора 20%-ного хлористого кальция (1% и объему раствора) при рН 9,0 - 9,5 при 70 С в течение часа, затем центрифугируют. Осадок выбрасывают. В растворе устанавливают рН 2,3 - 2,5 и центрифугируют. Осадок выбрасывают. В растворе устанавливают рН 8,0 - 8,5 добавлением 20%-ного раствора едкого натра и осаждают спиртом 96-ным (150% к объему) гепарин-сырец. Центрифугируют. Гепарин-сырец подвергают протеолизу при рН 8,5 - 9,0 в течение 24 час при температуре 37 С. Затем добавлением 2 н соляной кислоты устанавливают рН 2,3 - 2,5, выпавший осадок отделяют центрифугированием. В растворе устанавливают рН 8,0 - 8,5 добавлением 20% -ного едкого натра, вносят натрий хлористый из расчета 3 г на литр и осаждают спиртом 96-ным из расчета 170% к объему рас342629 Предмет изобретения Составитель Т. Головина Техред 3, Тараненко Корректор Л Орлова Редактор И. Бродская Заказ 21814 Изд. Мо 936 Тираж 406 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Типография, пр, Сапунова, 2 3твора. Выпавший осадок растворяют в десятикратном объеме дистиллированной воды и добавляют двууглекислого натрия из расчета 40 г на литр раствора. Смесь нагревают до кипения, охлаждают, осадок отфуговывают.Раствор обесцвечивают добавлением 4% (к объему) 30%-ного пергидроля при периодическом перемешивании в течение 12 час, затем нагревают до 70"С и охлаждают до 20"С, После чего в растворе устанавливают рН 7,6 - 8,0 добавлением 2 н соляной кислоты, вносят хлористого натрия из расчета 10 г на литр раствора и саждают спиртом 96-ным (100% к объему раствора). Выпавший осадок отделяют центрифугированием и растворяют в двадцати объемах дистиллированной воды. В растворе устанавливают рН 6 - 7,5 добавлением 2 н соляной кислоты, охлаждают до 5 С, добавляют хлористый натрий из расчета 3 г на литр раствора и осаждают охлажденным до 50"С спиртом 96-ным из расчета 70% к объему раствора. Выпав- ший в осадок гепанин отделяют центрифугированием, а из спиртового маточного раствора (отходы производства гепарина добавлением спирта 90-ного 50% к объему раствора) выделяют фракцию гепариноида в осадок. Осадок отделяют центрифугированием и обрабатывают 10%-ным раствором хлористого цинка. Полученную смесь центрифугируют. Прозрачный раствор осаждают спиртом 96"-ным (100% к объему раствора) при рН 6,5 - 7,0, устанавливаемым добавлением 2 н соляной кислоты и отстаивают при комнатной температуре 10 - 12 час. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, растворяют в 8%-ном растворе двууглекислого натрия при кипячении, охлаждают и центрифугируют. Прозрачный раствор осаждают спиртом 96-ным при рН 6,5 - 7,5, устанавливаемым 4добавлением 2 н соляной кислоты и отстаивают при температуре 5"С в течение 24 час.Осадок гепариноида отделяют центрифугированием, промывают охлажденным до Ь"Сспиртом 96"-ным и сушат эфиром,Выход препарата гепариноида в порошке -228,6 г.Активность порошка гепариноида характеризуется тем, что снижает содержание холе 1 О стерина в тканях и органах кроликов-самцовпосле шестидневного внутривенного введенияпри суточной дозе 100 мг/кг по сравнению сконтрольными кроликами в аорте на 32%, впечени на 49%, а надпочечниках на 48,5%,15 Способ получения вещества, обладающегогепариноподобным действием, отличающийся тем, что легкие животных подвергают экстракции водным раствором хлористого натрия при рН 8,5 - 9, подкисляют до рН 2,5, - 3 осадок обрабатывают раствором, содержащим хлориды натрия и кальция при рН 9 - 9,5 с последующим осаждением 96-ным спиртом гепарина-сырца, который обрабатывают протеолитическими ферментами при рН 8,5 - 9, доводят рН до 2,3 - 2,5, центрифугируют, в раствор добавляют спирт 96-ный при рН 8 - 8,5, выделенный осадок обрабатывают двууглекислым натрием, пергидролем, спиртом 96-ным при рН 7,6 - 8 отделяют маточный раствор, добавляют спирт 96-ный в количестве 50% к объему раствора, отделяют осадок, обрабатывают водным раствором хлорида двухвалентного металла, спиртом 96-ным, кипятят с водным раствором двууглекислого натрия и осаждают целевой продукт спиртом 40 96-ным при рН 6,5 - 7.