Способ получения алкалоидов спорыньи

ОПИСАНИЕИЗОЬЕЕТ ЕНИЯК ПАТЕНТУ 2%458 Союз Советских Социалистических Республикависимый от па МПК С 124 13/О М 1313534/31-16 влено 21,11,19 Приоритет 26.11.1968,13195 68, Итали Комитет по делам изобретений и открыти при Совете Министров СССРликовано 06.1.1971. Бюллетень0.111,19 а опубликования описания Иностранцымики, Анаклето Мингенетти и Келестино Спалла (Италия) Заяви Иностранная фирмасиета Фармацеутики Италия (Италия) ОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ СПОРЫНЬ Изобретение относится к области медицины и, в частности, касается получения алкалоидов спорыньи.Известен способ получения алкалоидов спорыньи, например аргокорнина и эргозина, путем глубинной ферментации культуры рода С 1 ач 1 серз в аэробных условиях на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, при температуре до 30 С и кислой среде с последующим выделением целевого продукта,Предложенный способ характеризуется использованием штамма С 1 аисерз рцгрцгеа Г, 1 43/14. Культура образует колонии более или менее извитых гифов толщиной 3 - 4 мк. Гифы разветвлены слабо; некоторые ответвления поднимаются.Надземные гифы, контактируя с воздухом, могут образовывать конидии. Однако в большинстве сред они отсутствуют. Мицелий погруженных в воду культур имеет вид пучков гифов, состоящих из очень неравномерных клеток толщиной от 3 до 10 мк. Когда клетки набухают и становятся округленными, гифы выглядят подобно нитке бус и могут образовывать конидии.Штамм С 1 ау 1 серз рцгрцгеа Г. 1 43/14 культивируют в жидкой среде глубинным методом в течение 10 - 16 суток в условиях аэрации при 20 - 30 С, преимущественнно 24 С, и рН т 50 смз питательостава: 1.-аспарагин 4 7 НзО 0,3 г, дрож.е 504 7 Н 20 7 мг, за 100 г, дисгиллимз. Добавляют гид. Колбы инкубиру 24 С и постоянном Авторыизобретения Альба Мари 23,5 - 6. В качестве источника углерода можно использовать глюкозу, сахарозу, маннит, сорбит, глицерин, лимонную кислоту, янтарную кислоту; в качестве источника азота - амми ак, аспарагин, пептон, казеин, продукты гидролиза (гидролизаты) и соли аммония, такие, как сульфат аммония, хлорид аммония и другие, минеральные соли - хлориды, фосфаты, сульфаты, магний, железо, цинк, мар- О ганец, калий.П р и м е р 1. Исходную культуру, выращенную на питательной среде С,4 М (содержит 40 г глюкозы, растительного жидкого экстракта 1 г (МН 4) НР 04 5 г, К 2 НР 04 1 г, 5 Мд 04 7 Н 20 2,5 г КС 1 0,5 г, т Е 5047 НО10 мг, 7 п 04 7 Н 20 10 мг, агара 18 г, дистиллированную воду до 1000 смз), переносят на скошенньй агар той же питательной среды, пнкубируют 10 дней при 28 С, и полученную О культуру используют для инокуляции двухколб емкостью до 300 смз. Каждая колба содержной среды следующего с 25 10 г, К 2 НР 04 0,5 г, МАКОжевой экстракт 0,1 г, Хп 504 7 Н,О 6 мг, сахар рованную воду до 1000 с рат окиси натрия до рН 5 зО ют в течение 5 дней при291458 Составитель В. А. Муравьева Техред Л. В. Куклина Корректор О. М. Кевалева Редактор Т. Фадеева Изд.114 Заказ 426712 Тираж 473 ПодписноеЦ 1.1 ИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж-З 5, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 встряхивании. 10% полученных культур используют для инокуляции колб емкостью 300 сма, содержащих 50 сма среды 668 следующего сотава: сахароза 60 г, глицерин 60 сма, глюкоза 80 г, дрожжевой экстракт 0,1 г, лимонная кислота 15 г, КС 1 0,125 г и дистиллированная вода до 1000 сма; рН 6,2. Культуру инкубируют 12 - 14 дней и получают 950 у/сма смеси алкалоидов, включающих 45% эргозина и 55 эргокорнина. Далее смешивают и фильтруют содержимое 120 колб, включающих от 950 до 1100 у/сма смеси алкалоидов, Фильтрат и мицелий экстрагируют отдельно, Фильтрат, объем которого доводится до 5 л при рН 9, дважды экстрагируют, каждый раз путем добавления 3 л хлороформа. Ыицелий разбавляют 50%-ным водным раствором аце. тона, содержащим 20% винной кислоты, и фильтруют. К фильтрату добавляют карбонат натрия до рН 9, и затем фильтрат трижды экстрагируют хлороформом.Экстракты смешивают и выпаривают в вакууме при 20 - 30 С до 1,5 части от первоначального объема, после чего экстрагируют 2%-ным раствором винной кислоты. Полученный раствор подщелачивают до рН 9 и экстрагируют хлороформом, экстракт выпаривают и осаждают сырой продукт добавлением гексана, Сырой продукт высушивают, затемрастворяют в небольшом объеме хлороформаи пропускают через колонку, наполненную400 г силикагеля, При элюировании хлоро 5 формом получают фракцию, содержащую эргокорнин, которая высушивается при обычных условиях,Остаток растворяют в бензоле в соотношении 1 - 20, концентрируют до получения /410 части исходного объема, выдерживают одну.ночь при 5 С и получают 2,5 г эргокорнина,который перекристаллизовывают из метилового спирта. Проводят элюирование полученного продукта, пропуская через колонку с15 двуокисью кремния, хлороформом и 4 оо метанола, и получают втору 1 о фракцию, содержащую 2,1 г эргозина. П р едме т изобретения20 Способ получения алкалоидов спорыньи,например эргокорнипа и эргозина, путем глубинной ферментации культуры рода Саисерз в аэробных условиях па питательной среде, содержащей источники углерода, азота и мине ральные соли, при температуре до 30 С и кислой среде с последующим выделением целевого продукта, отлицагощийся тем, что используют штамм Салсерз рпгрпгса Г. 1. 43/14.